高效液相色谱法测定藿胆丸含量
发表时间：2014-06-05 浏览次数：1136次
藿胆丸为中药复方制剂，具有芳香化浊，清热通窍之功效。用于湿浊内藴、胆经郁火所致的鼻塞、流清涕或浊涕、前额头痛。其处方中含有猪胆粉，为确保患者的用药安全，我们采用高效液相色谱法对其进行含量测定。方法简便，结果准确，报告如下。1 仪器与试药高效液相色谱仪(SHIMADZU)，LC-10ATvp泵，示差折光检测器(RID-10A)，柱温箱(CT0-10ASvp)。鹅去氧胆酸 对照品和猪去氧胆酸对照品由中国生物制品检定所提供，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。药品由哈尔滨华瑞生化药业有限责任公司提供。2 色谱条件与系统适用性试验[1]色谱柱：DiamonsilC18(4.6mmX250mm,5μ);流动相：甲醇-水(80：20)，用10%高氯酸调节pH值为3.0;示差折光检测器;柱温35℃。3 溶液的制备3.1 对照品溶液的制备取鹅去氧胆酸对照品和猪去氧胆酸对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含鹅去氧胆酸和猪去氧胆酸各2.5mg的混合溶液，即得。3.2 供试品溶液的制备取本品适量，研细，取约2.5g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醇100ml回流提取10小时，提取液蒸干，加40%氢氧化钠溶液25ml， 于120℃皂化5小时，放冷，过滤，用水洗涤容器及残渣至无色，溶液滴加盐酸调节pH值至1，用乙酸乙酯提取4次(40ml、30ml、30ml、 30ml)，合并提取液，用水洗涤2次，每次10ml，乙酸乙酯液置水浴上蒸干，残渣加流动相使溶解，转移至10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀， 即得。4 线性关系试验分别精密称取，猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸对照品250mg，置于50ml量瓶中，加80%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含5mg的对 照品溶液，精密量取4.0、8.0、12.0、16.0、20.0μl，分别测定，结果：猪去氧胆酸线性方程为Y=8324.5X- 2136.5(R2=0.9997)，鹅去氧胆酸线性方程为Y=7998.7X-392.33(R2=0.9998)。猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸在 20-90μg范围内峰面积与浓度成良好的线性关系。5 精密度试验精密吸取对照品溶液10μl，照含量测定方法，连续测定5次。结果猪去氧胆酸峰面积平均为161825.8，RSD为1.29%，鹅去氧胆酸峰面积平均为246360.5，RSD为1.74%，证明本方法测定猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸精密度良好。6 稳定性试验取含量测定项下样品，分别在0、2、4、6、8h吸取10μl注入液相色谱仪中，记录峰面积。峰面积平均值猪去氧胆酸为100896.3，RSD为1.53%，鹅去氧胆酸为75839.7，RSD为1.91%。结果表明，供试品溶液在8小时内基本稳定。7 重复性试验取同一批样品，分成6份制成供试品溶液，分别测定含量，平均含量为9.30mg/g，RSD为0.81%。8 回收率试验取已知已测定含量的藿胆丸，按3.2项制备溶液，再精密加入猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸对照品溶液，测定。经计算，猪去氧胆酸平均值为99.58%，RSD为0.96%，鹅去氧胆酸平均值为99.39%，RSD为0.78%。9 三批样品含量测定结果取三批藿胆丸按本文色谱条件与制备方法检测，含量分别为9.59、9.66、9.62mg/g。10 小结本文采用HPLC法测定猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸的含量，平均回收率为99.29%，RSD为0.78%，线性范围为30-90μg。本法简便、快捷，可用于藿胆丸中猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸的含量测定。【参考文献】[1] 赵陆华.高效液相色谱法分析中成药成分手册[M].北京：中国医药科技出版社，1994,185.
