柱切换离子色谱法测定厄贝沙坦中的叠氮根离子
发表时间：2014-08-05 浏览次数：1042次
厄贝沙坦(irbesartan，适用于治疗原发性高血压，是一种新型血管紧张素11受体拮抗剂，具有良好的降压作用和极少的不良反应。目前， 该药已列人《国家基本医疗保险药品目录》，市场应用普遍。厄贝沙坦为2一正丁基一3（(2一氰基联苯一4一基)甲基〕-1,3一二氮杂螺[4.4]一壬一 1一烯一4一酮(中间体)与叠氮化钠(NaN3)经环加成制得，由合成工艺可知，产品中易引人叠氮根离子。叠氮化物为剧毒物质，因此，对厄贝沙坦原料进行 叠氮根离子的控制是十分必要的。 美国药典(USP35一NF30)]5]和欧洲药典(EP7.0)X67均采用离子色谱法测定叠氮根离子，以 100mmol·L的氢氧化钠为淋洗液，采用强保留离子色谱柱进行分离，叠氮根离子限度为不得过10x10但该方法存在的问题有:1、该强保留离子色谱柱 已停止生产，如采用常规的离子色谱柱，淋洗液浓度必须大大降低，而厄贝沙坦在低浓度的淋洗液中不溶解，无法保证原料药中叠氮根离子的完全溶出;2、疏水性 化合物厄贝沙坦如进人色谱柱，易与色谱柱中的交换基团结合，造成保留时间的不重现。本方法采用柱切换离子色谱法,测定厄贝沙坦中的叠氮根离子，以90%甲 醇为溶剂溶解样品后直接进样，预处理柱(NG1柱)、富集柱(TAC一ULPl柱)和分析柱(ASl8柱)以适当的方式与六通阀连接，使之能并联、串联切 换使用。 预处理柱和富集柱作为前处理柱用于色谱柱前的样品处理，在去除样品基质的同时富集待测组分，又可保护分析柱，延长分析柱的寿命。该方法操作简便，并可在脂溶性药物的痕量离子测定中广泛应用。 1仪器与试药 1.1仪器装置ICS3000型离子色谱仪(美国Di-onex公司)，DionexIonPacAS18(4.0mmx250mm)阴离子分析 柱+AG18(4.0rnmx50mm)阴离子保护柱，其中DionexIonPaeNGl(4.0mmx35mm)保护柱作为预处理柱串联于六通阀1和 六通阀2之间，DionexIonPacTAC一ULPl(5.0mmx23mm)作为富集柱串联在六通阀2的定量环中，氢氧根淋洗液发生器(EG)，阴 离子微膜抑制器(ASKS一mm)，电导检测器(CD),DionexUltiMate3000HPLC泵作为浓缩泵，Chromeleon6.$色谱工 作站。 1.2试剂、样品及溶液配制NaN3,KBr及KN03(分析纯);甲醇、乙睛(色谱纯，德国Merck公司);实验用水为去离子水。 厄贝沙坦原料药由浙江华海药业股份有限公司和浙江天宇药业股份有限公司提供。系统适用性溶液:取NaN3,KB:及KN03适量，用90%甲醇制成Br 一、N3,NOg浓度均为0.2},g·mL一1的溶液，考察系统适用性。标准溶液:取NaN3约10mg，用90%甲醇溶解并稀释制成叠氮根离子浓度为 0.2g·mL的溶液，备用。样品溶液:取厄贝沙坦适量，加90%甲醇溶解并稀释制成每1mL中约含厄贝沙坦20mg的溶液，即得。 2方法 图1-3给出了色谱系统的工作过程，在连接时尽量缩短仪器单元与单元之间的连接线，以减少死体积。图1中样品装载到定量环。六通阀切换至图2状态时，厄 贝沙坦样品随去离子水进入NGl柱和TAC-ULPI中，疏水性厄贝沙坦被吸附在NGl柱中，叠氮根离子在NG1柱中不保留，瞬间洗脱后被富集在TAC一 ULP1中，废液排空。4min后，六通阀切换至图3状态，TAC一ULP1柱与分离柱连接，被富集的叠氮根离子经淋洗液梯度洗脱进行分离测定;同时用乙 睛洗脱NGl柱中截留的厄贝沙坦。图2切换至图3的时间(4min)经方法摸索后确定，可以避免厄贝沙坦及溶剂甲醇的干扰，并保证叠氮根离子没有损失。 3结果与讨论 3.Z分离条件的优化考虑到Br一和N03离子可能在实际样品中存在且容易对N}离子的测定造成干扰，故照“1.2”下方法配制系统适用性溶液，选用 ASll-HC,AS16和X518阴离子分析柱分别在大9,12mmol·I氢氧化钾淋洗液条件下进行色谱柱的筛选及分离条件的优化实验发现 A.S11-HC和AS16分离能力较弱，N、离子与干扰杂质不能有效分离;选用E1S18阴离子分析柱在9mmol·L氢氧化钾淋洗液条件下各离子分离 情况良好，保留时间合适，N}离子后出峰的杂质，用40rrunol"L-'氢氧化钾洗脱结果如图4所示。 3.2样品洛解落剂的选择厄贝沙坦 为脂溶性物质，在甲醇中的溶解性较乙睛中好，在水或低浓度的氢氧化钾淋洗液中不溶。参照美国药典，厄贝沙坦样品溶液的浓度为20mg"mL-1，故首选甲 醇为溶解溶剂。考虑到100%甲醇溶解样品可能会影响叠氮根的离子化，故分别选用85%,90%-95%的甲醇配制20mg"mL‘厄贝沙坦加标溶液进行 试验。85%甲醇可恰好溶解样品，但短时间放置厄贝沙坦即会析出;90%和95%甲醇测定结果一致，均可行。本方法选用90%甲醇为溶剂。 3.3柱切换时间的选择DionexIonPacNGl柱为苯乙烯一二乙烯苯键合的反相色谱柱，对疏水性的厄贝沙坦有较强的保留作用，对无机离子不保留。 实验发现，将NGl柱与检测器直接相连，以水为流动相，经10min，未见厄贝沙坦洗脱，切换为乙睛冲柱，5min内厄贝沙坦洗脱完全，故选用 IonPacNGl去除基质厄贝沙坦效果理想。TAC一ULP1为阴离子交换柱，对阴离子有较强的保留，将TAC一ULP1柱接于NG1柱和检测器之间， 以水为流动相，取标准溶液进样后，观察20rnin,未见叠氮根离子被洗脱，表明ULPl柱对叠氮根离子的富集能力可行，但富集的时间(即柱切换的时间) 有必要进行摸索。 取加标后的样品溶液，照“2”项下色谱条件，考察柱切换时间分别为 1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,7.0,10.0min时的出峰情况以及叠氮根离子峰面积的变化。柱切换时间在3min内时，溶剂甲醇 被带人分析柱中，在保留时间5min附近出现较大的溶剂峰，干扰测定，叠氮根离子峰面积随着柱切换时间的延长而增加;柱切换时间大于4min后，溶剂甲醇 无干扰，叠氮根离子峰面积趋于稳定，故选择柱切换时间为4min。峰面积与柱切换时间的关系如图5所示。 3.4方法学验证 取标准溶液连续进样6针，保留时间的RSD为0.12%，峰面积的RSD为0.61%，表明本方法进样精密度良好。取NaN3适量，加90%甲醇溶解并稀 释制成每1mL约含叠氮根0.04,0.10,0.16,0.20,0.24,0.40},g的溶液，作线性考察，峰面积(A)与浓度(C)的线性关系 为:A=1.0560一0.0157r2=0.9992 按叠氮根离子限度的50%,100%,150%浓度进行回收率试验，回收率在95.4%一 98.9%之间，回收率良好。叠氮根离子的定量限和最低检出限(SlN分别约为10和3)分别为10ng·mL,3ng·mL。 3.5实际样品测定取2个厂家6批样品进行测定，3批样品未检出，其余样品叠氮根离子含量在1x10-6一2x10-bg·g之间。本文采用在线基质去除及浓缩柱进样的方法，大大简化了样品的预处理过程，方法简便。 参考文献
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