全反式维甲酸诱导分化脑胶质瘤干细胞治疗胶质瘤的实验研究
发表时间：2015-04-17 浏览次数：1499次
胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤，尤以多形性胶质母细胞瘤恶性程度最高，患者的中位生存时间仍不到15个月。神经干细胞能显著抑制胶质瘤细胞的增殖、诱导其凋亡;神经干细胞能向胶质瘤迁移并将其包绕，可作为载体携带抗肿瘤分子实现抑制或杀死肿瘤细胞的作用，抑制胶质瘤细胞的生长或诱导其凋亡[2-4]。笔者通过实验分析了全反式维甲酸对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用及其机制，现报告如下。
1材料与方法
1.1实验材料：美国Hyclone公司的DMEM培养基、DMEM /F-12培养基、胎牛血清(FBS)、加拿大STEMCELL TECHNOLOGIES 公司的血清替代剂BIT。人神经干细胞(Rencell CX immortalized cells，SCC007)购买自Millipore公司，按说明手册培养;C6胶质瘤细胞系购自中科院上海细胞所;原代胶质瘤干细胞来自人脑胶质瘤手术标本富集培养。
1.2 实验方法：将培养细胞分成两组：①全反式维甲酸组：含血清培养基(含10%FBS的DMEM培养基)中力H.X终浓度为10 nmol/L的全反式维甲酸;②对照组：含血清培养基中含有与ATRA组等量的DMSO(终浓度<0.01%)。实验方法主要为C6脑胶质瘤细胞系的培养，选择生长状态良好的肿瘤细胞，经00.1%胰酶消化制成单细胞悬液或直接将肿瘤细胞球用PBS液清洗，分别重悬于以上不同培养基中，置3 7℃，5%CO.2、饱和湿度恒温培养箱培养，显微镜下观察。采用MRI检测胶质瘤的体积变化、流式细胞仪检测细胞增殖时相变化及免疫组化检测p27Kipl蛋白的变化。
1.3 统计学方法：采用统计学软件SPSS 18.00进行数据分析，相关计量资料以均数±标准差(x〖TX-*3〗±s)表示，组间比较采用单因素方差分析、LSD法、t分析、 χ.2检验等，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1肿瘤体积变化：显微镜下观察到C6胶质瘤细胞经分化培养基培养后6 h后均贴壁，1 d即开始分化增殖;相邻细胞间突起相互连接成网状。同时全反式维甲酸组的肿瘤球分化趋势更明显，细胞大小不一，形态各异。对照组的肿瘤分化趋势无明显变化，同时全反式维甲酸组较对照组肿瘤体积明显减小[(33.23±7.34)cm 3和(41.43±6.98)cm.3,P<0.05]。
2.2 细胞周期的变化：经过观察，全反式维甲酸组的 G0期细胞比例明显增加(P<0.05)，S期细胞比例明显减少(P<0.05)。
23p27Kipl蛋白的变化：经过观察，在诱导分化培养 24 h后，两组细胞p27Kipl的蛋白分泌水平比较差异有统计学意义(P<0.05);多重比较，全反式维甲酸组分泌水平显著高于对照组(0.76±0.21和0.52±0.25,P<0.05)。
3讨论恶性胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤之一，具有浸润性生长、易复发和播散转移的特点，是目前神经外科的治疗难点。胶质瘤干细胞被认为是胶质瘤发生、发展的基础，与肿瘤的发生和生长密切相关。调查显示，神经干细胞具有向胶质瘤细胞迁移的特性，神经干细胞固有的定向迁移特性不仅可以发挥抑制胶质瘤生长作用，还可作为特定基因的载体发挥靶向治疗作用。同时胶质瘤干细胞于体外神经干细胞培养条件下形成细胞球，呈悬浮球样生长;肿瘤细胞多处于Go期，在刺激信号的作用下可以进入细胞周期以对称和(或)不对称方式进行分裂增殖;能够多向分化成为各种肿瘤表型细胞，接种至免疫缺陷动物后能够致瘤;具有自我更新和无限增殖能力;具有较强的迁徙能力以及对放射治疗或药物化疗的耐受。体内研究证实神经干细胞具有向胶质瘤细胞迁移的能力，并将肿瘤包绕，向肿瘤迁移的神经干细胞数量越多，形成的肿瘤体积越小。体外干细胞条件下神经球培养法可成功获得高表达干细胞标志、具有自我更新能力和多向分化潜能的胶质瘤干细胞。全反式维甲酸是当前研究比较深入、作用最强的诱导分化剂之一，对肿瘤细胞增殖抑制途径广泛。当前我国大约有60%的白血病患者经过以全反式维甲酸为主的治疗后得到明显缓解和治愈。同时全反式维甲酸诱导胶质瘤干细胞分化的能力也得到了肯定，有学者发现全反式维甲酸与紫杉醇联合作用于接种了肿瘤细胞的移植瘤裸鼠能诱导细胞分化和凋亡，使肿瘤缩小。为此胶质瘤干细胞较其分化细胞对神经干细胞迁移更具趋化能力，并且与其分泌高水平的生长因子有关。也有学者认为全反式维甲酸可有效诱导胶质瘤干细胞分化，降低胶质瘤干细胞表型;可抑制胶质瘤干细胞Notch 信号通路，提示可作为靶向治疗胶质瘤干细胞的措施。本组资料中全反式维甲酸组较对照组肿瘤体积明显减小(P<0.05);Go期细胞比例明显增加(P<0.05)，S期细胞比例明显减少(P<0.05)。有研究证实肿瘤干细胞通过分泌大量的p27Kipl蛋白促进肿瘤血管生成，对肿瘤生长和侵袭起到了决定性作用，全反式维甲酸组的p27Kipl蛋白的表达明显增加(P<0.05)。总之，胶质瘤细胞系自身具有一定的干细胞特性，全反式维甲酸通过上调p27Kipl蛋白的表达而抑制大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖。
4参考文献
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收稿日期：2014-01-15编校：郑英善]
