转Notch1基因T淋巴细胞白血病双荧光示踪斑的建立及鉴定

发表时间：2014-06-17 浏览次数：1031次

引用：

卿恺,陈芳源,沈莉菁.转Notch1基因T淋巴细胞白血病双荧光示踪斑的建立及鉴定[J].上海交通大学学报（医学版）.2013,33(3):257—262

关键词：

Ncltchl,急性T淋巴细胞白血病,斑马鱼,双荧光示踪

作者：

1.卿恺,2.陈芳源,3.沈莉菁

作者单位：

1上海交通大学医学院附属仁济医院血液科,上海 200127;2上海南方模式生物研究中心,上海 201

出版年份：

2013

期刊页数：

257—262

收录者：

知网

摘要：

目的：在血管内皮增强型绿色荧光蛋白标记的斑马鱼系 (Π i1EGFP)中 ,转人Rag2启动子驱动的人源性截短型 Nolch1 基因 (ICN1),从中筛选并鉴定发生急性T淋巴细胞白血病 (T ALL)的斑马鱼，建立稳定传代的红绿双色示踪的T-ALL斑马鱼疾病模型。方法：构建 Rag2-ICN1-EGFP质粒，显微注射到斑马龟胚胎的单细胞期，利用荧光体视显微镜筛选 FO代 ,并建立稳定传代的转基因鱼系。通过荧光体视显微镜、 RT-PCR、 Westcrn blot验证ICN1n1RNA和蛋白的表达 ,并利用流式细胞术、外周血涂片方法鉴定 T-ALL斑马色模型的表型。结果：在 867条显微注射重组质粒的斑马鱼中 ,鉴定发现有⒛条 (23%)转基因阳性斑马鱼 ,为 FCl代转基因斑马鱼 ,其中雄鱼 9条 ,雌鱼 Ⅱ 条。在已性成熟的 FCl代成鱼之闸采取一对一形式交配 ,产下F1代 ,通过荧光体视显微镜、 RT-PCR、 Western blottin g在大体观、mRNA以及蛋白水平验证了 ICN1的表达 ;流式细胞术和外周血涂片结果显示 ,转基因 Fl代斑马鱼与fli1- EGFP斑马鱼相比，红细胞比例显著降低，淋巴细胞比例明显增高。锆伦：成功构建转 NlDtch l基因红绿双色示踪的T-ALL斑马鱼模型 ,为深人探训 Notch在促进 T-ALL发生中的调控机制以及利用这种疾病模型进行高通景的活体药物筛选提供了研究平台。

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