松花粉对腮腺组织表皮生长因子表达的影响

　　作者：刘红艳 宋晓晨 王春艳 牛嗣云 颜勇 庞晓静 作者单位：承德医学院附属医院口腔科，河北 承德 067000

　　【摘要】 目的 观察松花粉对腮腺组织表皮生长因子(EGFR)表达的影响。方法 D-半乳糖连续腹腔注射制作亚急性衰老雄性大鼠模型，采用免疫组织化学方法(SP法)观察高、中、低剂量(1 400、700、350 mg·kg-1·d-1松花粉对衰老的腮腺组织EGFR表达的影响。结果 EGFR在腮腺组织广泛表达，D-半乳糖所致亚急性衰老大鼠模型组EGFR的表达明显下降，与正常对照组比较差异显著(P<0.01) ;而给予松花粉后EGFR的表达明显上升，其中预防中剂量组效果明显。结论 松花粉具有改善衰老雄性大鼠腮腺功能紊乱，预防和延缓腮腺组织衰老的作用。

　　【关键词】 松花粉;衰老雄性大鼠;腮腺;表皮生长因子受体

　　既往抗衰老的研究多集中在心、脑、血管方面，在肺、生殖系统方面也多见报道。但国内有关松花粉预防和延缓口腔最大唾液腺——腮腺衰老作用的研究甚少。本实验应用不同剂量松花粉，对D-半乳糖所致亚急性衰老大鼠腮腺组织表皮生长因子受体(EGFR)的表达进行研究，观察松花粉对衰老大鼠腮腺功能的影响，探讨松花粉预防和延缓腮腺组织衰老作用的机制，为筛选抗腮腺衰老中药提供实验依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 动物 选清洁级8周龄雄性SD大鼠90只(由北京大学医学实验动物科学部提供)。体重180～220 g，随机分成9组，正常组(10只);松花粉预防组(中、低剂量组各10只);模型组(10只)，松花粉延缓衰老组(高、中、低剂量组各10只)，阴性对照组(10只)，维生素E(VE)阳性对照组(10只)。

　　1.2 方法

　　1.2.1 药品与试剂 松花粉购于中国新时代集团，D-半乳糖购于北京化学试剂公司，EGFR检测试剂盒购于北京中杉金桥生物有限公司。

　　1.2.2 模型建立 SD大鼠按200 mg·kg-1·d-1腹腔注射D-半乳糖(用生理盐水配成5%的溶液),除正常组外，其余各组均连续用药50 d，每天1次，制备亚急性衰老动物模型。

　　1.2.3 给药方法 松花粉用1%羧甲基纤维素钠稀释，高、中、低剂量分别按1 400、700、350 mg·kg-1·d-1灌胃，阳性对照组用VE按35 mg·kg-1·d-1灌胃给药。预防组在注射D-半乳糖的同时灌胃松花粉，连续50 d，每日1次。延缓衰老组、阳性对照组、阴性对照组大鼠在造模成功后每天灌胃松花粉、VE和生理盐水，连续50 d，每日1次。

　　1.2.4 EGFR表达的检测 将正确取材常规固定、包埋的腮腺组织块连续切片，常规行免疫组织化学染色(SP法)，显微镜下观察。EGFR结果判定：细胞胞浆染成棕黄色粗颗粒或细颗粒弥散分布为阳性反应细胞。定量数据处理：用图像分析系统进行细胞计数，每个标本检查3张切片，每张切片检查10个高倍视野，随机选取组织结构保存较好的部位，每个视野计数阳性细胞数和阴性细胞数，计算免疫阳性细胞的百分比。

　　1.3 统计学处理 所得数据采用x±s表示，将EGFR检测结果建立数据库，用SPSS统计软件进行统计学处理。用t检验和q检验进行分析。

　　2 结果

　　模型组EGFR表达量明显减少，与正常组相比有显著性差异(P<0.01)，与阴性对照组、松花粉延缓衰老高剂量组接近(P>0.05)，而松花粉预防组和松花粉延缓衰老中、低剂量组EGFR的表达均明显增高(P<0.01)(图1)。其中松花粉预防中剂量组表达效果最显著，松花粉延缓衰老中剂量组的效果又好于延缓衰老高、低剂量组、VE阳性对照组(P<0.05)(表1)。

　　图1 各组EGFR的表达(400×)(略)

　　表1 各实验组大鼠腮腺EGFR的表达(略)

　　与模型组比较:1)P<0.01,与预防中剂量组比较:2)P<0.01，与延缓衰老中剂量组比较：3)P<0.05

　　3 讨论

　　本研究依照刘学丽〔1〕等报道对SD大鼠以腹腔注射方式给药，并应用D-半乳糖成功建立了D-半乳糖诱发的亚急性衰老动物模型〔2〕，使得各实验组同等起始，具有良好的可比性，实验结果更可靠。

　　松花粉作为传统医药宝库中的传统药材，现已被收入《中国药典》。有研究报道松花粉能够有效降低血脂，促进锌的吸收利用〔3〕;松花粉作用于人肺成纤维细胞能明显促进细胞群体倍增水平，降低细胞死亡数目〔4〕。此外牛嗣云〔5〕等报道松花粉具有改善衰老雄性大鼠下丘脑-垂体-睾丸轴功能紊乱的作用。本研究经观察各实验组大鼠腮腺EGFR的表达情况，用免疫组织化学方法(SP法)证实大鼠腮腺组织EGFR广泛表达，阳性产物主要位于腮腺腺泡细胞的胞浆中。结果表明：松花粉预防用药的效果优势明显，其中预防中剂量组效果最佳;松花粉延缓衰老中剂量组的效果明显好于延缓衰老高、低剂量组、VE阳性对照组，其中松花粉延缓衰老高剂量组效果最差。本研究提示松花粉能够提高腮腺EGFR的表达，松花粉对预防和延缓腮腺组织衰老具有调节作用;松花粉抗衰老预防用药，我们提倡应用中剂量以期获得最佳的临床疗效。

　　【参考文献】

　　1 刘学丽，朱延勤，潘伟娜，等.对大鼠半乳糖性白内障实验模型的探讨.北京实验动物科学与管理，1994;11(2)：2-3.

　　2 顾以芍.实验性D-半乳糖诱发动物白内障造膜的探讨.徐州医学院学报，1987;(1)：12-6.

　　3 赵 霖，鲍善芬，U Eidelsbutg,等.松花粉对缺锌幼鼠营养作用的实验研究〔J〕.营养学报，2000;22(1)：14-7.

　　4 赵立新，喻 陆.松花粉对人肺成纤维细胞增殖活性影响的实验研究〔J〕.东南大学学报，2004;23(2)：79-81.

　　5 牛嗣云，庞晓静，高福禄，等.松花粉对D-半乳糖亚急性衰老模型大鼠下丘脑-垂体-睾丸轴的调节作用〔J〕.中国老年学杂志，2006;26(8)：1098-9.