心肌炎患儿TNFα IL-6与心肌酶的相关性分析

作者:苗晓华,李锦娟 作者单位：晋城市泽州县妇幼保健院(048000)

  【摘要】  　　目的：探讨肿瘤坏死因子（TNFα）、白细胞介素6（IL-6）在病毒性心肌炎（VM）患儿发病中的作用。方法：采用酶联免疫吸附（ELISA）方法，对30例VM患儿在急性期和恢复期（28例）以及20例正常儿童血清和外周血单个核细胞（PBMC）培养上清液诱生TNFα、IL-6进行检测。结果：VM急性期血清和PBMC上清液TNFα、IL-6水平明显高于恢复期和正常对照，恢复期仍高于对照组。急性期血清肌酸磷酸激酶同工酶（CK-MB）增高28例，乳酸脱氢酶同工酶（LDH1）增高26例。相关分析提示：VM急性期TNFα、IL-6与CK-MB和LDH1呈正相关。结论：TNFα、IL-6在心肌炎的致病中起一定作用，其相关指标呈动态变化，可作为病情变化及预后的一个观察指标及依据。

【关键词】  心肌炎　肿瘤坏死因子　白细胞介素6

　　病毒性心肌炎是小儿常见的心血管疾病之一，近年来发病有增加的趋势，对于其发病机制国内外研究多年，免疫机制所起的作用日益受到重视。TNFα、IL-6被称为炎症细胞因子，参与了许多炎症性疾病的发生和发展。本研究对小儿VM不同时期的血清和PBMC诱生的TNFα、IL-6的动态变化进行检测，旨在从临床方面进一步探讨VM发病的免疫机制，为估计病情和预后提供客观依据。

    1  临床资料

    1.1  病例选择

    受检对象系我院2003年2月～2006年2月住院VM患儿，其中男17例，女13例，年龄3岁～14岁。在病情的急性期（入院后24 h内）和恢复期（发病后1月～2月）进行各项指标检测，所有病例均无用激素史，同期同年龄组健康儿童20例，作为对照组（2 W前，无上呼吸道感染）。

    1.2  诊断标准

    诊断标准及临床分期根据第六届小儿心血管专业学术会议修订的VM诊断标准［１］，并除外其它疾病；病原学诊断依据是心肌炎发病前1 W～2 W有病毒感染史，发病早期外周血中柯萨基病毒特异性抗体IgM阳性。

    1.3  方法

    1.3.1  标本收集：急性期患儿于入院次日收集清晨空腹静脉血6　mL,用乙二胺四乙酸二肝抗凝；恢复期患儿在发病后1月～2月间采血。

    1.3.2  心肌酶谱检测由我院检验科完成。

    1.3.3  PBMC诱生TNFα、IL-6无菌条件下用淋巴细胞分离液（上海试剂二厂）分离PBMC，用RPMI 1640将PBMC调成１×106/mL，培养液中加脂多糖（LPS，10 μg/mL），置37 ℃，5% CO2培养箱培养72 h，离心收集上清液后，-30 ℃以下储存待测。

    1.3.4  血清和PBMC上清TNFα、IL-6水平的检测血清和PBMC上清液中TNFα、IL-6的检测均采用酶联免疫吸附双抗体夹心法（ELISA）。用450 nm酶标仪测OD值，通过绘制标准曲线，计算样品中TNFα、IL-6的含量。试剂盒由北京晶美生物工程有限公司提供（进口分装）。

    1.3.5  统计学处理，各期间采用方差分析和两两比较q检验或成对t检验。急性期TNFα、IL-6和CK-MB、LDH1的相关关系采用直线相关分析。

    2  结果

    2.1  病毒性心肌炎各期心肌酶谱的变化

    VM急性期血清CK-MB、LDH1均高于恢复期和正常对照，LDH2则低于恢复期和正常对照。LDH3与恢复期和正常对照无显著意义（见表1）。表1  VM各期血清CKMB、LDH测定结果及比数P<0.01

    2.2.  各组血清TNFα、IL-6水平

    VM患儿血清TNFα、IL-6水平呈动态变化，急性期血清 TNFα、IL-6水平明显高于恢复期和对照组。恢复期血清水平明显降低但仍高于正常对照组(见表2）。 表2  VM患儿与对照组血清TNFα、IL-6检测结果

2.3.  PBMC诱生TNFα、IL-6的水平

    VM急性期PBMC经LPS刺激后产生TNFα、IL-6的水平明显高于恢复期和正常对照，恢复期TNFα、IL-6有高于正常对照组（见表3）。表3  VM患儿各期对照组PBMC上清液TNFα、IL-6检测结果

    2.4  急性期血清TNFα、IL-6水平与CK-MB和LDH1的相关性急性期血清TNFα、IL-6与CK-MB、LDH1呈正相关（见表4）。表4  患儿急性期血清TNFα和IL-6与CK-MB和LDH1的相关性

    3  讨论

    小儿VM的发病及病情的进展与T淋巴细胞和细胞因子的异常密切相关。TNFα具有相似的促炎症能力，是主要的炎症细胞因子，并可诱导其它炎性细胞因子的表达，二者的协同作用在促进炎症、休克及死亡的机制中有重要地位［２］。IL-6是细胞因子网络中的重要成份，亦是主要炎性细胞因子之一，它能刺激细胞间粘附因子1的合成，减少其抗体的表达，使炎性细胞大量聚集在病变区域；增加中性粒细胞在化学趋化因子刺激下，释放毒素性氧基，与其它炎性细胞因子协同发挥细胞毒性作用［３］。Simth等［４］在实验中发现，给患心肌炎小鼠模型用TNF，结果心肌炎严重程度和死亡率明显高于对照组，而用抗TNF抗体可明显减轻小鼠心肌的损害，降低死亡率。Neumann等［５］对具有感染后自身免疫性心肌炎有抵抗力的小鼠感染COXB3V，并分别用脂多糖（LPS）、TNF，小鼠发生严重心肌炎，而单独用COXB3V或LPS、TNF均不发生心肌炎。Henke等［６］研究了体外人单核细胞和COXB3V的相互作用，COXB3V可增强单核细胞的游走速度和粘附力，并刺激单核细胞释放细胞因子TNF和IL-6等。感染COXB3V的单核细胞上清液对心肌细胞显示明显细胞毒活性，但它可被抗TNF抗血清所取消，提示COXB3V诱导细胞因子从单核细胞释放，参与了病毒对心肌的损伤。本实验结果表明，病毒性心肌炎急性期，血清和PBMC上清液中TNFα、IL-6的水平明显增高，其中以TNFα为著。恢复期其水平降低，与国外学者的研究报告一致，证实这些细胞因子是心肌炎的重要炎性细胞因子，其引起的免疫性炎症参与了病毒感染所致的损伤。

    当心肌细胞受损时，可使许多心肌内的酶释放入血，最具特征性的是CK-MB和LDH1、CK-MB几乎只存在于心肌细胞中，在心肌炎的早期诊断上有重要价值。本研究检测：VM患儿血清CK-MB和LDH1，结果急性期CK-MB和LDH1明显增高，恢复期下降。急性期血清TNFα、IL-6与CK-MB、LDH1是正相关关系。提示血清TNFα、IL-6水平和心肌损伤程度关系密切，其血清水平升高者心肌损伤严重，故临床上可通过检测其血清水平，做为判断病情和预后的依据。

【参考文献】  　　［１］ 李家宜.小儿病毒性心肌炎诊断标准．中级医刊，2000，39：60.

［２］ Dinarello CA. The proinflammatory cytokines interleukin1 and tumor necrosis factor and treatment of the septic shoch syndrome.J infect Dis,2002,163：1　177～1 188.

［３］ Youker K, Smith W, Anderson DC, et al. Neutrophil adherence to isolated adult cardiac myocytes.J clin Inves,2002,89：602～609.

［４］ Huber SA, Polgar J, Schiltheiss P. Augment ation of pathogenesis of coxsackievirus B3 infections in mice by exogenous administration of interleukin1 and interleukin2 .J Virol,2004，68：195～206.

［5］ Smith SC, Allen PM. Neutralization of endogenous tumor necrosis factor ameliorates the severity of myosin induced myocarditis.Circulation Research,2002,70：856～863.

［6］ Henke A, Mohr C, Sprenger H, et al. Coxackieviral 3induced production of tumor necrosis facter alpha, IL-1 beta and IL-6 in human monocytes. J immunol,2002,148：2　270～2　277.