基因多态性与急性白血病的相关性研究

作者：张凌岩    作者单位：250021 济南，山东省立医院血液科

【关键词】  P2X7基因 单核苷酸多态性 白血病 急性

    0  引言

    P2X7基因位于12号染色体，有13个外显子，其编码产物是一种选择性离子通道型嘌呤能受体，在造血细胞及免疫细胞中介导ATP诱导的细胞凋亡。发生在P2X7基因外显子13的单核苷酸多态性可以导致P2X7受体功能明显改变，其杂合性改变可使P2X7受体功能下降50%，而纯合性改变可使其功能完全丧失[1]。为探讨P2X7基因1513 A→C多态性在急性白血病中的意义，我们对24例急性白血病患者及42例正常对照进行了检测及分析。     

    1  材料与方法

    1.1  病例  急性白血病患者24例，其中AML 15例，ALL 9例；男14例，女10例，中位年龄31岁。正常对照42例，男23例，女19例，中位年龄33岁。患者标本取自骨髓2毫升，对照者标本取自外周血5毫升。

    1．2  方法

    1．2．1  DNA提取  常规酚/氯仿法提取基因组DNA。

    1．2．2  PCR扩增基因组DNA

    引物序列为：上游引物5’ACTCCTAGATCCAGGGATAGCC3’，下游引物5’ –TCACTCTTCGGAAACTCTTT

    CC3’。每份样本反应体系为25μl，组成如下：10×缓冲液2.5μl，4×dNTP (20mM) 0.25μl，上游引物及下游引物各0.5μM，MgCl2(50mM) 0.75μl，Ampli Taq Gold DNA聚合酶（Applied Biosystem）1.25u, DNA 25ng。PCR条件为：预变性95℃ 5分钟； 变性94℃  1分钟，退火62℃   1分钟，延伸72℃  1分钟，33个循环；最后72℃延伸10分钟。

    1．2．3  测序

    应用BigDye Terminator Sequencing Kit（ABI，USA）及ABI 3100型DNA测序仪进行双向DNA测序。

    1．3  统计学分析  Fisher’s exact test。

    2  结果

    测序结果见图1所示。3例白血病患者基因型为A/C，其中AML 2例，ALL 1例。患者与正常对照C等位基因频率的差异有显著性（P=0.046), 见表1。

    图1  DNA测序结果：从上至下分别

    为A/A、A/C及C/C基因型

    3  讨论

    P2X7基因的外显子12及13编码一个长达240个氨基酸的细胞内C末端，这一结构与其功能密切相关。一般认为P2X7受体可介导细胞凋亡，但也有学者发现该受体同时具有诱导凋亡及促进增殖两种作用[1,2]。Adinolfi等[3]报道P2X7受体在进展性CLL（chronic lymphocytic leukemia, 慢性淋巴细胞白血病）的表达明显高于惰性CLL，提示P2X7在高表达时有促进细胞增殖的作用。Wiley等[4]报道P2X7基因1513A→C多态性在CLL患者中的阳性率是正常对照的3倍，提示C等位基因可能与CLL的发生有密切关系。但Thunberg等[5]发现CLL患者该SNP阳性率低于正常对照，且阳性者的生存期较阴性者显著延长，提示C等位基因是预后良好的因素。我们的研究结果显示在这一组急性白血病患者中P2X7基因1513A→C阳性率明显低于正常对照，与Thunberg的研究结果相似。本研究结果提示在急性白血病中P2X7受体可能主要发挥促进细胞增殖作用，而P2X7基因1513A→C多态性可能与急性白血病的发生呈负相关。

【参考文献】  ［1］ Gu BJ，Zhang W，Worthington RA，et al. A Glu496 to Ala polymorphism leads to loss of function of the human P2X7 receptor［J］. J Biol Chem，2001，276（14）：1113511142.

［２］ Baricordi OR，Melchiorri L，Adinolfi E，et al. Increased proliferation rate of lymphoid cells transfected with the P2X(7) ATP receptor［J］. J Biol Chem，1999，274（47）：3320633208.

［３］ Adinolfi E，Melchiorri L，Falzoni S，et al. P2X7 receptor expression in evolutive and indolent forms of chronic B lymphocytic leukemia［J］. Blood，2002，99（2）：706708.

［４］ Wiley JS，Dao-Ung LP，Gu BJ，et al. A loss-of-function polymorphic mutation in the cytolytic P2X7 receptor gene and chronic lymphocytic leukaemia: a molecular study［J］. Lancet，2002，359（9312），11141119.

［５］ Thunberg U，Tobin G，Johnson，et al. Polymorphism in the P2X7 receptor gene and survival in chronic lymphocytic leukaemia［J］. Lancet，2002，360（9349）：19351939.