银屑病中细胞凋亡相关基因bax、Fas、FasL的检测
发表时间：2009-08-18 浏览次数：729次
作者：叶应生 作者单位:523000广东省东莞市莞城医院皮肤科
【关键词】 银屑病
【摘要】 目的 探讨细胞凋亡相关基因bax、Fas、FasL在银屑病发病中的作用及意义。 方法 采用免疫组化SABC法检测这几种基因在银屑病组织中的表达。 结果 在银屑病的角质形成细胞中，发现促凋亡基因Fas、bax阳性表达。 结论 促凋亡基因Fas、bax在银屑病的发病中起重要作用。银屑病皮损中角质形成细胞凋亡增多是针对细胞过度增殖的一种内在保持稳态的机制，可能与bax、Fas及FasL等凋亡相关分子的异常表达有关。 关键词 银屑病 细胞凋亡 bax Fas FasL Detection of bax，Fas，FasL in psoriasis Ye Yingsheng Department of Dermatology，Dongguan Guancheng Hospital，Dongguan523000. 【Abstract】 Objective To explore the importance of the apoptotic related gene bax，Fas，FasL in pathogenesis of psoriasis.Methods These genes were detected in psoriasis patients by using immunohistochemical staining SABC meth-ods.Results We found the promoting apoptosis gene fas and bax revealed positive reactivities result in keratinocytes of psoriasis.Conclusion It is indicated that the promoting apoptosis gene Fas and baxwere very important in the pathogen-esis of psoriasis.The increase of apoptotic keratinocytes was possibly one kind of internal homeostatic mechanism against the hyperplasia of epidermal cells，and might related to abnormal expression of apoptosis-associated proteins bax，Fas and FasL. Key words psoriasis apoptosis bax Fas FasL 银屑病是一种以角质形成细胞良性增生和真皮炎症细胞浸润为病理特征的慢性复发性疾病。近年来银屑病与细胞凋亡的关系逐渐受到越来越多学者的重视。国外有学者报道银屑病表皮中角质形成细胞凋亡异常增多 ［1］ 。为探讨这几种基因在银屑病发病中的意义，笔者对银屑病患者皮肤中bax、Fas、FasL的表达和细胞凋亡情况进行了检测。
1 资料与方法 1.1 一般资料 确诊为寻常型银屑病患者20例，男10例，女10例;年龄9～56岁（平均35岁）。另6例正常人皮肤组织，皆取自皮肤外科行重睑术、面部美容切除术者的皮肤，石蜡包埋作为对照组。测定前先将石蜡包埋组织块做常规组织切片及HE染色，在光镜下核对诊断，证实其病理诊断无误方采用。 1.2 试剂 兔抗人Fas多抗、兔抗人bax多抗及链酶亲和素-生物素-过氧化酶复合物免疫组化试剂盒（简称SABC试剂盒）均购自武汉博士德生物工程公司。 1.3 方法 组织蜡块经连续切片（约6μm）黏附于APES处理后玻片上，常规脱蜡至水;Fas、bax基因的检测采用SABC法，阳性对照分别为武汉博士德生物工程公司提供的Fas、FasL、bax基因阳性对照片，阴性对照为不加一抗。 1.4 结果判断 显微镜下观察，棕黄色为阳性结果。阳性强度判断标准如下:强阳性（+++）指50%以上细胞阳性染色;中等强度阳性（++）指25%～50%细胞阳性染色;弱阳性（+）指25%以下细胞阳性染色;阴性（-）指细胞均无任何阳性染色。
2 结果 6例正常人皮肤组织中Fas、FasL和bax基因为阴性表达。20例银屑病组织中Fas及FasL基因在17例银屑病组织中呈阳性表达;bax基因在14例中呈阳性，阳性染色遍布表皮各层角质形成细胞中及真皮浅层浸润的淋巴细胞上。在缺少一抗的对照反应中结果均为阴性，而作为阳性对照的正常淋巴结及Fas、FasL、bax基因阳性对照片则呈广泛强阳性染色。见表1。
表1 正常对照组与银屑病组Fas、FasL、bax基因的表达情况 （略） 3 讨论 Fas、FasL主要表达于激活的淋巴细胞上，被用于进行免疫杀伤和免疫调节 ［2］ 。Fas抗原又称Apo-1或CD95，Fas分子是个典型的Ⅰ型膜蛋白，属肿瘤坏死因子（TNF）/神经生长因子（NGF）受体家族中的一员。研究发现Fas单克隆抗体在体内体外与Fas结合后均能导致表达Fas的细胞发生凋亡 ［3］ ，从而证明FasL是一种识别Fas配体，并将凋亡信息传递给细胞的细胞表面受体，故Fas基因又称“凋亡基因”。bax基因属于bcl-2基因家族成员，其功能与bcl-2基因相反，为促凋亡基因，bax蛋白可与bcl-2蛋白形成异源二聚体，从而抑制bcl-2基因的抗凋亡作用。我们的实验中正常的皮肤组织部分基底细胞bcl-2基因呈阳性反应，这与国外学者的报道相符合 ［4，5］ ，有文献报道这些阳性细胞为黑素细胞 ［6］ ，正常表皮中黑素细胞与基底角质形成细胞的比例为1∶30，提示黑素细胞死亡和再生的控制是非常严格的。黑素细胞bcl-2基因强阳性表达可能与保护它们避免受内外环境的影响如紫外线的照射，减少凋亡有很大关系。在银屑病中除黑素细胞和浸润的淋巴细胞为阳性外，表皮增生的角质形成细胞均为阴性，这提示bcl-2基因可能在银屑病中所起的作用不大。而本实验中银屑病组织促凋亡基因Fas、bax均广泛阳性表达，这与国外学者的结论一致 ［4，6］ 。因此，笔者认为在银屑病中促凋亡基因Fas、bax起重要作用。笔者还推测银屑病中血管内皮过度表达Fas可吸引FasL阳性淋巴细胞的攻击而凋亡，有助于缓解大量的血管新生。 参考文献 1 Bianchi L，Farrace MC，Nini G，et al.Abnormal bcl-2and“Tissue”transglutaminase expression in psoriatic skin.Invest Dermatol，1994，103（6）:829-833. 2 Norris DA，Travers JB，Leuny DYM.Lymphocyte activation in the patho-genesis of psoriasis.J Invest Dermatol，1997，109:1-4. 3 Nagata S，Golstein P.The Fas death factos.Science，1995，267（10）:1449. 4 Van den Oord JJ，Vandeghinste N，De leyM，et al.Bcl-2expression in human melanocytes and melanocytic tumors.Am J Pathol，1994，145（2）:294-300. 5 Wrone-Smith，Johason T，Nelson E，et al.Discordant expression of bcl-X and bcl-2by keratinocytes in vitro and psoriatic keratinocytes in vivo.Am J Pathol，1995，146（5）:1079-1087. 6 Oishi M，Maeda K，Sugiyama S.Distribution of apoptosis-mediating Fas antigen in human skin and effects of anti-Fas monoclonal antibody in human epidermal keratinocyte and squamous cell carcinoma cell lines.Arch Dermatol Res，1994，286（7）:396-407.
