二样膏皮肤毒性试验研究

二样膏皮肤毒性试验研究作者：易华，王强 ，程晓芸    作者单位：1．甘肃中医学院附属医院，甘肃兰州 730020；2.甘肃中医学院，甘肃兰州730000 【摘要】  目的观察二样膏对大鼠及豚鼠皮肤的毒性作用。方法用Wistar大鼠进行皮肤急性毒性试验，用豚鼠进行皮肤刺激性和皮肤过敏性试验。结果二样膏外涂大鼠完整皮肤和破损皮肤均未引起急性毒性反应，对豚鼠皮肤也无刺激性和过敏性。结论二样膏是较安全的外用制剂，可在临床上推广应用。 【关键词】  二样膏；急性毒性；皮肤刺激性；皮肤过敏性二样膏由止痛膏与铁箍膏混合而成，使用时外用适量涂患处，主要用于治疗早期疮疡，在清热解毒、消肿止痛等方面疗效显著。我们用Wistar大鼠进行皮肤急性毒性试验，对豚鼠进行皮肤刺激性和皮肤过敏性试验，进一步验证二样膏的安全性，结果报道如下。1试验材料    1.1药品与供试品    铁箍膏：由大青叶、乳香、大黄、胆矾、五倍子、没药、黄连、樟丹、芙蓉叶、黄柏组成，具有消肿拔毒、止痛散结作用。止痛膏：由浙贝母、白芷、生大黄、广木香、薄荷水、樟脑、冰片、麝香组成，具有消肿止痛、祛腐生肌功效。二样膏：铁箍膏与止痛膏按1∶1的比例与等量的蜂蜜混匀作为供试品，由甘肃中医学院附属医院自制。另取120 ｇ蜂蜜作为对照品。阳性致敏物：2，4-二硝基氯苯，批号930806，军事科学院药材供应站提供，用丙酮配置成1.0 ％的致敏浓度和0.1 ％的激发浓度。    1.2动物    SPF级健康Wistar大鼠56只，雌雄各半，体质量180～250 ｇ；普通级豚鼠98只，雌雄各半，体质量250～320 ｇ。均由甘肃中医学院科研实验中心提供，动物批号：scxk(甘)2004-0007-0000330。实验室温度（24±1）℃，相对湿度60 %。2方法与结果    2.1皮肤急性毒性试验    取Wistar大鼠56只，按体质量随机分为7组，给药前24 h用剪刀将大鼠背部脊柱两侧的毛剪掉，剪毛范围相当于体表面积的10 ％左右[1]。第一组为铁箍膏低剂量组，将2.5 g铁箍膏均匀地涂敷于大鼠背部脱毛区，并用纱布遮盖，再用医用橡皮膏固定，持续24 h后，用温水去除残留的供试品。第二组为铁箍膏高剂量组，给予铁箍膏5.0 g。第三组为止痛膏低剂量组，第四组为止痛膏高剂量组，第五组为二样膏低剂量组，第六组为二样膏高剂量组，方法及剂量同铁箍膏低、高剂量组。第七组为对照组，给予对照品5.0 g，方法同前。连续7 d观察大鼠的行为活动、皮毛光泽、饮食、眼和黏膜、呼吸、体质量、死亡情况，结果未发现任何毒性反应。再将大鼠背部脱毛区消毒，用16号灭菌针头将皮肤划“#”字破口，破口横竖各约2 cm，以渗血为度，立即在划破皮肤部位涂上受试物。观察指标同上，并与对照组比较。    结果显示，供试品外涂大鼠完整皮肤和破损皮肤时，大鼠的行为活动、皮毛光泽、饮食、眼和黏膜、呼吸、体质量与对照组比较，差异无统计意义（P>0.05）。先后观察14 d，无大鼠死亡，未出现任何急性毒性反应。    2.2  皮肤刺激试验    取豚鼠48只，按体质量随机分为6组，每组8只，每组又分完整皮肤组和破损皮肤组。给药前24 h用剪刀将豚鼠背部脊柱两侧毛剪掉，剪毛面积每侧约50 cm2，破损皮肤组将豚鼠背部脱毛区消毒，用16号灭菌针头将皮肤划“#”字破口，破口横竖各约2 cm，以渗血为度，左右两侧皮肤破损程度一致，每组豚鼠左侧背部均涂敷供试品3 g，右侧背部均涂敷对照品3 g，并用纱布覆盖，再用医用橡皮膏固定，持续24 h后，用温水洗净药物。分别观察涂抹部位1 h，24 h，48 h，72 h皮肤刺激反应，根据“中药新药临床前研究指导原则”中的有关内容，按表1和表2进行皮肤刺激反应评分及强度评价[2]。表1  皮肤刺激反应评分标准表2  皮肤刺激强度评价标准平均分值  结果各组豚鼠给药1 h，24 h，48 h，72 h分值均为“0”。3种药物对豚鼠完整皮肤和破损皮肤均无刺激性。    2.3  皮肤过敏试验    取豚鼠50只，按体质量随机分为空白对照组、铁箍膏组、止痛膏组、二样膏组和阳性对照组5组，每组10只，雌雄各半，给药前24 h用剪刀将豚鼠背部脊柱两侧毛剪掉，剪毛面积每侧约3 cm×3 cm，各给药组每只豚鼠左侧脱毛区涂敷相应供试品1 g，并用纱布覆盖，再用医用橡皮膏固定，持续6 h去除覆盖物。第7 d和第14 d以同法分别给药1次，空白对照组涂敷对照品1 g，阳性对照组涂敷0.1 ％2，4-二硝基氯苯0.2 mL，方法同各给药组。于末次给药后1 d，各给药组每只豚鼠在右侧脱毛区涂敷相应供试品1 g，同法固定，6 h后去除覆盖物，空白对照组和阳性对照组分别给予对照品1 g、 0.1 ％ 2，4-二硝基氯苯0.2 mL，方法同给药组。即刻观察，然后分别于1 h，24 h，48 h，72 h再次观察皮肤过敏反应情况，根据“中药新药临床前研究指导原则”中的有关内容，按表3和表4进行过敏反应评分、致敏强度评价[2]。结果见表5。表3皮肤过敏反应评分标准表5药物对豚鼠皮肤过敏反应结果由表5可见，空白对照组、各给药组均未引起豚鼠皮肤出现红斑、水肿等过敏反应，致敏率均为0。阳性对照组豚鼠皮肤出现红斑、水肿等过敏反应，致敏率为100 ％。3  结论    以上实验结果表明，二样膏外涂大鼠完整皮肤和破损皮肤均未引起急性毒性反应，对豚鼠皮肤也无刺激性和过敏性。说明二样膏在临床中用于疮疡清热解毒、消肿止痛是较安全的外用制剂，适合进一步在临床中广泛推广应用。【参考文献】  [1]李晓红，刘萍，刘璐.疱疹宁乳膏皮肤毒性实验研究[J].儿科药学杂志，2002，8（1）：16-17.   [2]戴鸾春，欧阳强.癌痛宁巴布剂皮肤刺激和致敏试验[J].时珍国医国药，2000，11（12）：1063-1064.