人脑脊液中利多卡因的高效液相色谱法测定

　　作者：王学军 作者单位：(青海红十字医院麻醉科)

　　【摘要】 目的 建立检测人脑脊液中利多卡因的方法。方法 采用RP-HPLC法测定人脑脊液中药物浓度，色谱柱为Lichrospher C18(4.6×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(62∶38∶0.3∶0.6)，流速1 mL·min-1，检测波长220 nm。结果 在0.1～8 mg·L-1范围内利多卡因峰面积与内标峰面积之比与浓度线性关系良好, 最低检测浓度为0.03 mg·L-1，回收率利多卡因为93.77～95.64%，日内、日间RSD均小于10%。结论 本测定方法灵敏、准确、简便，适合于对利多卡因的临床使用监测及药代动力学研究。 王学军(1970～)，汉族，青海籍，主治医师

　　【关键词】 利多卡因 脑脊液 RP-HPLC

　　DETERMINATION OF LIDOCAINE BY RP-HPLC

　　IN HUMAN CEREBROSPINAL FLUID

　　Wang Xuejun

　　(Dept of Anesthesia, Qinghai Red Cross Hospital)

　　Abstract Objective To develop a simple, sensitive and rapid method for the determination of lidocaine in human cerebrospinal fluid. Methods The concentration of lidocaine was determined by RP-HPLC method, the analysis involved a 250 mm × 4.6mm column packed with C18(5 μm), the mobile phase consisted of methyl alcohol-water-glacial acetic acid-triethylamine(62∶38∶0.3 ∶0.6), dertermination wave was 220 nm. Results A good linearity was obtained in the range of 0.1～8 mg·L-1,the recovery of lidocaine was between 93.77～95.64%, the relative stand deviations of within-day and between day were less than 10%, the minimal detectable concentration in plasma was 0.03 mg·L-1. Conclusion The result demonstrated that the method was sensitive, accurate and simple for the determination of lidocaine in human cerebrospinal fluid, it was suitable for the pharmacokinetics study and clinical monitoring of lidocaine.

　　Key words Lidocaine Cerebrospinal fluid RP-HPLC

　　利多卡因是常用的局部麻醉药，其半衰期短、安全范围小，若剂量控制不当，易致过敏性休克、室颤、窦性停博甚至死亡等全身毒性反应[1，2]。利用利多卡因行椎管内麻醉是临床上常用的局部麻醉方法,包括硬膜外麻醉、蛛网膜麻醉及腰- 硬联合麻醉[3]。利多卡因椎管内麻醉意外而引起人身伤亡的案例时有报道[3～5]。由于椎管内硬膜外间隙血管丰富,且纤细菲薄,穿刺或置入导管时容易造成血管内注射,且不易察觉。为了预防和降低利多卡因的使用不良反应，本文建立了人脑脊液中利多卡因RP-HPLP测定方法，用于治疗药物监测。

　　1 试药与仪器

　　1.1 药品与试剂

　　利多卡因对照品由中国药品生物制品检定所提供;内标多奈派齐(10mg·L-1)由南京晟翔医药化工研究所提供;甲醇为色谱纯，由山东禹王试剂公司提供;乙酸乙酯为分析纯，由上海试剂一厂提供。

　　1.2 仪器

　　高效液相色谱仪：日本岛津LC-10AT泵，岛津SPD-10A 紫外检测器，N2000型色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所);TGL-16B高速离心机(上海安亭科学仪器厂);XW-80A旋涡混合器(上海精科有限公司)。

　　2 色谱条件

　　色谱柱：Lichrospher C18(4.6×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(62∶38∶0.3∶0.6)，流速1 mL·min-1，检测波长220 nm，进样量为20 μL。

　　3 对照品溶液配制

　　精密称取利多卡因对照品10 mg置10 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得1 mg.mL-1利多卡因储备液。以此标准储备液稀释配制成各种浓度的对照品溶液。

　　4 样品处理

　　精密吸取样品0.5 mL于具塞刻度离心管中，加入0.1 mL 浓度为10 mg·L-1的多奈派齐(内标)，涡漩混匀后，加入5 mL乙酸已酯，涡漩振荡提取(5 min)，离心(4000 r·min-1)10 min 后，将有机相移至另一离心管中，置于50 ℃水浴中用氮气吹干。残渣以100 μL流动相溶解，取20 μL进样。

　　5 方法学

　　5.1 色谱行为

　　在本实验条件下，利多卡因和内标与杂质分离良好，基线平稳，内标、利多卡因出峰时间分别为5.4、7.0 min，色谱图见图1。

　　5.2 标准曲线制备及最低检测浓度测定

　　取离心管数支，分别加入空白脑脊液0.5 mL及适量对照品溶液，致利多卡因的浓度为0.1、0.5、1、2 、4、8 mg·L-1，涡漩混匀后按“样品处理”项下操作，每种浓度做5份，记录峰面积。以样品峰面积与内标峰面积之比f对浓度C进行回归计算，得回归方程：利多卡因：f = 0.368×C-0.018(r=0.9977)。按上述条件测得利多卡因的最低检测浓度均为0.030 mg·L-1。

　　5.3 精密度试验

　　按“标准曲线制备”项下操作，配制浓度为0.1、2、8 mg·L-1的标准脑脊液样品，按“样品处理”项下操作, 以样品峰面积与内标峰面积之比f计算日内与日间精密度，结果见表1。

　　Tab 1 precision of lidocaine in plasma (n=5)

　　药品浓度

　　(mg·L-1)日内精密度日间精密度fRSD%fRSD%0.10.021±0.0016.480.021±0.0027.53利多卡因20.409±0.0204.780.414±0.0255.9681.582±0.0493.081.581±0.0513.215.4 回收率试验

　　取离心管数支，分别加入对照品溶液适量，以甲醇配成含利多卡因浓度为0.1、2、8 mg·L-1的溶液后，加入0.1 mL浓度为10 mg·L-1的多奈派齐，涡漩混匀后以氮气吹干，用100 μL流动相溶解残渣，精密吸取20 μL进样分析，得样品与内标峰面积之比fs。另取离心管数支，分别精密加入不同量的对照品溶液及0.5 mL空白脑脊液，配成含利多卡因为0.1、2、8 mg·L-1的脑脊液样品，每种浓度各做5份样品，乙酸乙酯提取后准确分取4 mL，加入0.1 mL浓度为10 mg·L-1多奈派齐，涡漩混匀后以氮气吹干，用100 μL流动相溶解残渣，精密吸取20 μL进样分析，得样品与内标峰面积之比fx。利多卡因在脑脊液中的回收率按公式R%=fx/fs×5/4×100%计算，结果见表2。

　　Tab2 Recovery of lidocaine in cerebrospinal fluid (n=5)

　　药品浓度

　　(mg·L-1)fsfxR%0.10.0230.017±0.00192.39利多卡因20.4500.336±0.02293.3381.6701.306±0.05197.75

　　6 方法应用

　　分别取待检血浆(青海红十字医院提供)0.5 mL，加入0.1 mL多奈派齐，按“样品处理”项所示方法操作，结果测得样品中利多卡因的浓度为0.23 mg·L-1。

　　7 讨论

　　脑脊液中利多卡因的检测，文献报道较少，血浆中利多卡因的检测文献报道方法大多采用氯仿、乙醚-正己烷、乙醚-二氯甲烷等作为提取溶剂 [6]，这些溶剂具有易乳化、毒性大、价格昂贵等特点。本文在别人工作的基础上，经过系统试验，建立了人脑脊液中利多卡因RP-HPLC测定方法，该方法简单、灵敏、准确，可广泛用于利多卡因的临床药物监测和药代动力学研究。

　　采用甲醇-水-冰醋酸-三乙胺作为流动相，以醋酸乙酯提取测定血浆中利多卡因，色谱峰形好，干扰少。流动相中三乙胺对色谱峰有明显改善作用，醋酸主要是调整流动相PH值，避免体系过于碱性，同时还起到一定的缓冲作用。

　　对比了氯仿、乙醚、环己烷、醋酸乙酯等提取溶剂，并重点考察了醋酸乙酯，结果发现四种溶剂提取效果均较好，故最终选择毒性小、价格相对便宜的醋酸乙酯作为提取溶剂。

　　【参考文献】

　　[1]刘俊杰，赵俊.现代麻醉学.第2版.北京：人民卫生出版社，1997：799

　　[2]叶红枫,赵中苏.纤维支气管镜术前利多卡因麻醉死亡2例分析[J].中国内镜杂志,2000，6(1)：36

　　[3] 吴在德. 外科学. 第5版. 北京:人民卫生出版社,2000.74 - 124

　　[4]郑俊卿. 硬膜外导管误入蛛网膜下腔3例报告[J]. 福建医药杂志, 1999, 21 (1) : 116

　　[5]赵海群,贾保平. 硬膜外腔止痛导管穿入蛛网膜下腔1例[J]. 临床麻醉学杂志, 1996, 12 (4) : 210

　　[6]赵维中,宋必卫,孙昕,等. 利多卡因缓释胶丸皮下植入的药代动力学[J].中国药理学通报，1997，13(6)：552