1例慢泳血红蛋白携带者报告

作者:杨静,岳秀兰,崔珊娜,苏燕 

作者单位：1.包头医学院生物化学教研室，内蒙古包头 014010；　2.包头医学院2007届临床医学本科学生

     【摘要】  　　目的：对参加生物化学实验教学的学生进行异常血红蛋白筛查。方法：采用醋酸纤维薄膜进行异常血红蛋白（Hemoglobin，Hb）筛查，对异常血样进行血红蛋白百分含量测定、HbA2定量及家系分析等方法进行进一步验证。结果：在2003级本科学生中发现了1例异常血红蛋白携带者，其血样经过电泳确定其为稳定型慢泳β链异常血红蛋白。结论：此病例的发现，丰富了科学研究的资料，也提高了学生的学习兴趣。

【关键词】  异常血红蛋白；电泳；β珠蛋白链；

　　异常血红蛋白（Hb）筛查实验是我教研室开展的生物化学实验课内容之一，是目前国内各医学院校的生物化学实验课内容中独有的，也是我教研室科研与教学相互促进的创新性实验。这个实验项目自开展以来，已经对历届开展生物化学实验课的学生进行了筛查，不仅在教学中使学生进一步掌握了电泳和Hb的相关知识，也为我们进行科学研究积累了大量的资料。在我带2003级本科班生物化学实验时，对参加实验的学生进行筛查时发现了一例异常Hb携带者，现将结果报告如下。

　　1  对象与方法

　　1.1  材料

　　初筛血样来自我院2003级本科班一名同学的耳血；醋酸纤维薄膜（2cm×8cm）、浸泡醋酸纤维膜的TBE缓冲液（pH8.5）、电泳槽硼酸缓冲液（pH8.6）、丽春红染色液、漂洗液、电泳仪、电泳槽均为生物化学实验室教学专用，各种溶液的配制见文献[1]。

　　1.2  检测方法

　　1.2.1  溶血液制备

　　通过CCl4法制备红细胞溶血液，具体方法如下：取新鲜的抗凝全血，离心去血浆，用生理盐水洗涤红细胞3次，最后一次尽量吸去上清液。向压积红细胞层加入1.5倍体积蒸馏水和0.5倍体积CCl4，剧烈振摇，3 000rpm离心20min，吸取上层Hb溶液为红细胞溶血液[2]。

　　1.2.2  电泳

　　用滤纸取耳血1滴以线状涂于已在pH8.5 TEB缓冲液中浸泡好的醋酸纤维薄膜上，然后放在盛有pH8.6硼酸缓冲液的电泳槽中电泳30min。泳毕，取出薄膜直接观察并记录红色区带的分布情况，然后放入丽春红染色液中染色数分钟，再转入漂洗液中漂洗至背景无色，观察结果。

　　1.2.3  Hb百分含量测定

　　Hb百分含量测定用光密度法[3]。具体方法为：首先进行浸膜、电泳，方法同初筛，点样量为15μL。泳毕，用丽春红染色液染色并漂洗，然后进行洗脱：剪下HbA 、HbA2、异常成分及与HbA大小相当的空白膜带，分别加入到盛有10mL、2mL、2mL、2mL的0.4mol/L NaOH溶液的试管中洗脱。浸泡半小时，不时轻轻振摇，待Hb完全洗脱后，混匀，用浸泡空白膜条带的溶液调零 ，在420nm波长下比色。得出各吸光度值后计算异常Hb含量，并通过以下公式进行HbA2定量。

    HbA2β（%）=HbA2吸光度HbA吸光度×5+ HbA2吸光度×100

　　1.3  家系调查

　　为了了解先证者的异常基因的来源，我们调查了其母系及父系家族成员，但由于除父母之外，家族无其他成员，我们只获取了其父母的耳血，并进行电泳分析。

　　2  结果

　　2.1  醋酸纤维薄膜电泳

　　将先证者溶血液在pH8.6的条件下进行醋酸纤维薄膜电泳，经过染色，发现在HbA与HbA2之间出现一异常Hb区带（图1）。

　　2.2  Hb百分含量测定

　　经过Hb含量测定，先证者异常Hb成分占27%，HbA2含量为2%，均在正常值范围内（正常成人HbA2为1.1%~3.2%）[4]。

　　2.3  家系调查  　　本文先证者为女性，23岁，汉族，内蒙古托县人，对其父母耳血进行采样，同样于pH8.6条件下进行电泳并作家系调查，结果（图2）显示，先证者的异常基因来自父系，其家系图谱如图3。

　3  讨论

    Hb是一种结合蛋白，分子量64kD，由珠蛋白与血红素结合而成。绝大多数Hb都是由一对β链和一对非β链组成。正常成人有三种Hb：HbA（α2β2约占97%）、HbA2（α2 δ2约占2%）和HbF（α2γ2约占1%）[5]。在pH8.6的条件下电泳时，向阳极泳动最快的是HbA，其后是HbA2，HbF与HbA的等电点接近，在醋酸纤维薄膜电泳时通常与HbA分不开[1]。故正常成人溶血液于pH8.6条件下电泳时应为两条区带。许多异常Hb具有与正常Hb不同的电泳行为，故可用醋酸纤维薄膜电泳的方法进行初步筛查。

    本实验中先证者溶血液于pH8.6的缓冲液中进行醋酸纤维薄膜电泳时，在HbA和HbA2之间，出现一条异常Hb区带，为慢泳异常Hb，根据Hb组成，电泳结果可推断此异常Hb为β链异常Hb。而先证者既往健康，Hb百分含量测定及HbA2定量均在正常范围内，故推断为稳定型异常Hb。

    我们将先证者父母耳血采回进行家系调查，同样在pH8.6的条件下进行醋酸纤维薄膜电泳，其父亲全血电泳结果发现在HbA与HbA2之间出现了一条异常Hb区带（图2），异常区带与先证者异常区带在同一位置，且异常Hb含量也与先证者相同，故推断先证者异常Hb基因可能来自父系，符合显性遗传的规律[6]。

    通过异常Hb筛查实验，不仅使学生更加了解异常Hb，掌握了应用电泳技术筛查异常Hb的技术，也提高了学生学习生物化学课程的兴趣，而且也丰富了我们科学研究的资料，为我教研室进行进一步的科学研究提供了便利条件。

【参考文献】  　　[1] 杜颋．基础医学课程实验指导（下册）[M]．北京：人民军医出版社，2003：65-67.

　　[2] 曹国栋，秦文斌，雎天林．内蒙古蒙古族中发现的异常血红蛋白HbD Beograd[J]．包头医学院学报，1997,13(4)：1-2.

　　[3] 陶元鋆．血液学及血液学检验[M]．北京：人民卫生出版社,1997：134.

　　[4] 曾溢滔．人类血红蛋白[M]．北京：科学出版社，2002：122-126.

　　[5] 李璞．医学遗传学[M]．2版．北京：中国协和医科大学出版社，2004：175-176.

　　[6] 秦良谊，岳秀兰，雎天林，等．包头地区异常血红蛋白调查及群体遗传学研究[J]．内蒙古医学杂志，1996,16 (1)：8-10.