参考方法测定血清葡萄糖的测量不确定度评价

测量不确定度是表征合理的赋予被测量之值的分散性,与测量结果相联系的参数。它是以参数形式定量表示无法修正的那部分误差的范围,是用来表征被测量之值所处区间的一种评定。在不确定度评估过程中,要对整个实验的所有步骤进行讨论,找出不确定度来源,并进行计算,由数据可以清晰得出不确定度分量中起主要作用的因素。通过分析不确定度,把测试分析误差控制在允许限度内,保证测试结果有一定的精密度和准确度,使分析数据在给定的置信水平内,有把握达到所要求的质量。当发现质量控制数据将超出预先确定的判据时,应采取有计划的措施来纠正出现的问题,同时采取措施防止报告错误的结果。

为了提高临床检验数据的可比性,促进临床诊断和治疗的有效性,欧盟通过体外诊断用品导则(hrective 98/79/EC)要求体外诊断用品的量值溯源性:“校准物质/质控物质定值的溯源性必须通过已有的高一级的参考方法/参考物质予以保证。我回关于体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性(GE/T214159008/IS017511∶⒛03)于⒛08硐9开始实施。IS0对溯源性的定义中明确指出比较链中每一步都同时给出该值的不确定度a因此,如何评价参考方法测量结果的不确定度成为一个亟待解决的问题。本文按照美国疾病与预防控制中心(Centcrs凡r Discasc Cc,ll⑾l allll PrevellticJll,CDC)推荐的血清葡萄糖(GLU)测定参考方法(己糖激酶法),并结合中华人民共和国行业标准(W⒊T35Cl⒛11沪,参照GUM19gD、GUM⒛∞、JJF1059和CNAS-GL05等标准对测量结果的不确定度进行评价,以期为采用标准曲线法定量的,如血清葡萄糖[叫、血清总胆红素H和血清尿素网等参考方法测量结果的不确定度评价提供一定的科学依据。

1材料和方法

1.1样本新鲜血清。

1.2试剂与仪器葡萄糖SRM917c(美国国家标准局,NBS),其余试剂均购自⒊gma公司。按照参考方法配制,实验用水为去离子水。UⅤ-2450紫外可见分光光度计(带半导体温控和磁力搅拌×⒏血adztl,Jap⋯)和比色皿lQS,特定光径(10+O.01)mm]用于吸光度(A)的测定;机械移液器(Eppelldof AG,Gemmy)用来吸取标准溶液和试剂;SevenMulti型pH计(Mettler T。lcdo,switzdand)用来测定溶液pH值;1犯4型'点温计(Flttke USA)用于测定溶液和室内温度;ⅩmO~sDu型分析天平(MettlσT。leclo,Switzerlalld)用于称取标准物质和试剂;HH60型数显恒温搅拌循环水浴箱(常州国华,中国)用于控制试剂和样本的温度。

1.3测定方法测定原理:在己糖激酶催化下,葡萄糖和ATP发生磷酸化反应,生成葡萄糖巧-磷酸与ADP。葡萄糖-6-磷酸在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶催化下脱氢,生成6一磷酸葡萄糖酸,同时使NAD(P)还原NAD(P)H。在NAD(P)转化成NAD(P)H的同时,伴有狃0nm处摩尔消光系数的上升,摩尔消光系数变化与葡萄糖含量成正比,通过检测339nm处摩尔消光系数即可测定血清中葡萄糖含量。本次实验在1d内完成,重复测定样本和试剂空白各2次,将测定结果记录后进行统计学分析。

2结果

2.1被测量的数学模型血清葡萄糖的含量c(mmol/L)按下列公式计算:汀式中,⒕为样本的吸光度;30为校正曲线的截距;乃为校正曲线的斜率∫为标准溶液浓度修正因子。

2.2不确定度的来源分析测量不确定度的主要来源有样本的A值、校正曲线拟合、标准溶液浓度(包括标准物质称量、定容、稀释、再定容)和测量重复性。取样体积、水浴时间等因素已在重复性中体现,故不单独考虑这些因素。

2.3分析和量化不确定度分量标准和实际样本测定:按参考方法进行重复测定,测量数据见表1。重复性(r印)由表1可知,实际样本用参考方法进行两次测定,其标准偏差为0。OO55,那么重复性导致的标准不确定度为:

3讨论

测量不确定度是衡量检测结果准确性和可靠性的重要参数,它在实验室中正确应用可以衡量实验室科学管理和检测水平。因而对其进行合理的分析和评定是实′验室质量体系的重要组成部分,也是医学实验室质量管理的重要内容。我们通过测量血清葡萄糖的实验来探讨医学实验室对参考方法测定血清葡萄糖的测量不确定度的评定方法,并试图发现影响测定血清葡萄糖的主要影响因素。使用电子表格计算方法冂计算每个分量对测量结果的不确定度的相对贡献。血清葡萄糖的标准不确定度为0.14mmo1/L。使用直方图表示各分量的相对贡献(图2),可以得知,吸光度、标准曲线的斜率和截距是影响血清葡萄糖测量不确定度的主要分量。因此,对标准溶液的配制和测定应严加控制,确保测量结果具有较小的不确定度。总之,参考方法测定血清葡萄糖的测量不确定度主要来源于标准曲线的斜率、截距和吸光度,因此,对标准溶液的配制和测定应严加控制,确保测量结果具有较小的不确定度。临床实验室的测量不确定度与传统的测量误差相比,更能反映测量的水平。对临床检验工作有一定的指导意义。本文中所描述的评估模式可以为采用标准曲线法定量的,如血清葡萄糖、血清总胆红素和血清尿素等参考方法测量结果的不确定度评价提供一定的科学依据。