肺癌患者痰标本中端粒酶活性表达及意义

作者：马缠过，徐阳，赵岚，王宏涛，杨淑梅

作者单位：陕西省人民医院：1放疗中心，2呼吸科，3胸外科，陕西 西安 710068

 【关键词】  端粒酶；肺肿瘤；痰；TRAPPCRELISA

基金项目：陕西省科技攻关项目（2003K10G51）　　0引言

　　端粒酶异常活化与肺癌的发生、发展及转归密切相关. 肺癌端粒酶活性的研究最早始于对手术切除的肿瘤标本的检测,以后逐渐扩展到纤维支气管镜活检标本、血液、肺泡灌洗液等的检测. 这些检测手段对肺癌的诊断及治疗均有一定的临床意义,但也存在局限性. 我们采用TRAPPCRELISA法测定肺癌患者痰液中的端粒酶活性,探讨其在肺癌早期诊断中的临床价值.

　　1材料和方法

　　1.1材料

　　收集肺癌患者痰标本33份，男27例,女6例,平均年龄55．3岁，均经活检或手术后病理检查证实为肺癌（鳞癌28例,腺癌1例，小细胞肺癌4例）. 所有患者既往均未接受过治疗，并且排除口腔及鼻咽部肿瘤. 对照组为同期住院的肺部良性疾病患者27例,男20例,女７例,平均年龄５０岁,其中慢性支气管炎13例, 支气管扩张症8例,肺部炎性假瘤4例,肺结核2例. 采用上海华美生物工程公司生产的TRAPPCRELISA试剂盒检测.

　　1.2方法

　　常规检查排除口腔及鼻咽部炎症，留取患者晨起后新鲜深部痰液3～5 mL,采取深咳嗽或(和)给予拍背等措施利于深部痰咳出；无痰者，用生理盐水雾化吸入后再深咳排痰. 将痰液收集到无菌器皿中，部分患者于纤维支气管镜检查后留取痰液，并于30 min内进行痰标本处理. 立即用4℃无菌生理盐水冲洗痰标本2次，加入与痰液等量的NaOH（1 mol／L），进行碱化处理,取溶解痰液于试管中进行离心，弃上清液，于试管中加入5 mL无菌生理盐水（4℃）进行再次离心，弃上清液，取沉淀置于-80℃冰箱中待用或直接用于端粒酶活性检测. 按照TRAPPCRELISA试剂盒使用说明书进行操作. 实验步骤包括端粒模板的提取、扩增、杂交等流程. 每例标本均做2个平行反应. 根据试剂盒提供的使用说明，在酶标仪上用波长450 nm读取A值，以空白对照校零，阴性对照A值≤0.05时按0.05计算； A值>0.05时按实际值计算. 样本A值>2.1倍阴性对照值时，判断端粒酶活性阳性.统计学处理：采用χ2检验和t检验，以P<0.05为有统计学意义.

　　2结果

　　肺癌组痰标本中的端粒酶活性阳性率为48.5%（16／33）,而肺部良性疾病对照组为11.1%（3／27）,差异有统计学意义（P<0.05）. 33例肺癌患者痰标本中的端粒酶活性水平（A值）高于对照组,差异有统计学意义［（0.326±0.231） vs (0.087±0.108), P<0.05）］. 但肺癌组中不同组织类型痰标本中的端粒酶活性水平比较,差异无统计学意义（P>0.05）.

　　3讨论

　　痰标本中脱落上皮细胞的相关分子生物学检查，敏感性高，特异性好，误诊的可能性很小，是肺癌最有希望的早期诊断措施. 端粒酶活性存在于生殖细胞、永生细胞、活化的淋巴细胞以及大多数的人类原发肿瘤细胞中. Kim等［1］研究统计了15种肿瘤的644个标本,端粒酶阳性者545例,占85%,而相应的293例正常组织中仅21例阳性,占7%. 因此端粒酶活性已成为人类诊断肿瘤的重要标志,端粒酶亦可能成为肿瘤治疗的一个新靶点. 肺癌以往文献报道的端粒酶活性检测的样本多来源于手术切除标本,纤维支气管镜检查活检组织或肺泡灌洗液等,其总的阳性率多在80%～97%之间,刘瑾等［2］分析了28篇有关端粒酶和肺癌诊断的流行病学文献，结果显示，端粒酶阳性者患肺癌的危险性是端粒酶阴性者的66.43倍；在肺癌人群中端粒酶阳性出现的概率是非肺癌人群的12.13倍；而在肺癌人群中端粒酶阴性出现的概率是非肺癌人群的0.22倍. 可见端粒酶是一种敏感性及特异性都较高的肿瘤标志物. 本研究试图为肺癌的普查及筛查寻找无创、适宜于早期诊断的简便方法. 痰标本容易得到，重复性好，能直接反应气道及肺部的病变. 痰标本中端粒酶活性测定可用于肺癌的辅助诊断. 既往［3-4］采用手术、活检、肺泡灌洗液等标本测定端粒酶活性检出率较本组偏高,但总的趋势一致. 杨晔［5］等研究发现，端粒酶活性与肺癌的病理类型无关，而与癌细胞的分化程度有关，端粒酶活性越高，肺癌分化越低，侵袭生长能力越强，对肺癌预后判断有潜在价值. 支气管肺癌发生和发展特点及支气管肺泡结构的解剖特点，决定了痰标本检查在肺癌早期诊断中的重要性.

　　总之,本实验样本量小，关于痰标本端粒酶活性高低与肺癌肿块位置、病理类型及其分化程度的关系尚无明确结论，有待进一步研究.

【参考文献】  　　［1］Kim NW，Piatyszek MA， Prowse KP，et al. Specific association of human telomerase activity with immortal cells and cancer ［J］. Science, 1994,266（5193）:2011-2015.

　　［2］刘瑾,杨青,兰亚佳,等.肺癌患者端粒酶表达的Meta分析［J］.中国肺癌杂志,2001,4(4):299-301.

　　［3］王金亮,王嘉祺,安真光,等. 端粒酶活性在肺癌患者痰液脱落细胞中表达的临床价值研究［J］.中国肺癌杂志,2002,5(1):38-40.

　　［4］胡坚,孙鹏,李任远,等. 非小细胞肺癌病理类型及临床分期与血液端粒酶活性相关性研究［J］.中华实验外科杂志,2004,21(10):1257-1258.

　　［5］杨晔，程庆书，王小平，等. Bcl2,p53表达及端粒酶活性三者在非小细胞肺癌发生中的相关性［J］.第四军医大学学报,2003,24(23):2199-2202.