大肠腺癌DNA和RNA定量分析

　　作者：刘同亭 孙自勤 王要军　　作者单位:250031山东济南解放军济南军区总医院

　　【摘要】 目的 探讨大肠腺癌DNA和RNA含量的变化意义及预后的关系。 方法 对我院1995～1998年收治的术后随访74例病人的大肠腺癌石蜡标本重新切片，用流式细胞技术进行DNA和RNA含量测定，探讨其变化意义与转移预后的关系。 结果 大肠腺癌DNA异倍体与组织学类型无关，RNA含量与组织学类型关系密切。DNA异倍体和RNA含量大肠腺癌的Dukes'分期、淋巴结转移、其它脏器转移和根治术后复发均有关。术后生存5年以上病人的DNA异倍体出现率和RNA含量较术后1年内死亡病人低，两者差异有非常显著性(P<0.01)。 结论 DNA和RNA含量测定可作为判断大肠腺癌的恶性程度、估价预后的客观可靠指标。

　　关键词 大肠腺瘤 转移 DNA

　　笔者采用流式细胞技术对我院74例大肠腺癌术后随访病人的标本进行了DNA和RNA定量分析，旨在探讨大肠腺癌DNA和RNA含量的变化意义及与预后的关系。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 我院1995～1998年收治的74例大肠腺癌病人，其中男45例，女29例，年龄28～87岁，平均55.4岁。其中结肠癌41例，直肠癌33例。全部病例均经手术治疗和病理确诊，术后定期随访。

　　1.2 方法

　　1.2.1 单细胞悬液的制备 将存档肿瘤组织蜡块切成厚度为80～100μm的4～5片，分别放入试管中，加入二甲苯3～5ml，每3h加入1次，共加3次。常规水化，将脱蜡及已水化的组织片置于重叠的100目铜网和260目尼龙网上，以眼科镊轻搓，边搓边以生理盐水冲洗入小烧杯中，直至组织完全搓完。以1500r/min离心5min，再以磷酸缓冲液漂洗离心(800r/min)，共2次，去上清液后将每份样品分别放入2支试管内待测。

　　1.2.2 DNA和RNA含量测定 用溴化乙啶插入DNA染色法染色DNA(染液含溴化乙啶10mg/L，RNA酶10mg/L、细胞打孔剂1.0%);用FACScan型流式细胞仪(美国BD公司生产，变异系数CV在5.0%以内)，分别测试每份样品的DNA和RNA含量，每份样品测10 4 个细胞。用DNA指数(DI)表示DNA含量，用RNA指数(RI)表示RNA含量，DI与RI计算公式如下:DI=(检测样品G 0 /G 1 期细胞峰道均值)/(对照样品G 0 /G 1 期细胞峰道均值);RI=10×(检测样品G 0 /G 1 期细胞峰道均值)/(对照样品G 0 /G 1 期细胞峰道均值) [1] 。1.2.3 诊断标准及方法 二倍体(2C)及异倍体(An)DI诊断标准:DI为0.95～1.05(DI=1±CV，CV取0.05)，近二倍体诊断标准:DI为0.90～1.10(DI=1±2CV)，DI≥11.1为含量高于正常。

　　1.3 统计学方法 DNA异倍体计数资料用χ 2 检验，RNA含量资料用t检验。

　　2 结果

　　见表1，表2，表3。

　　表1 大肠癌分期、组织学类型与DNA异倍体和RNA含量的关系 (略)

　　表2 大肠癌转移、复发与DNA异倍体和RNA含量的关系 (略)

　　表3 不同生存时间与DNA异倍体和RNA含量的关系 (略)

　　3 讨论

　　应用流式细胞术分析肿瘤细胞DNA和RNA含量，可从核酸代谢水平上了解肿瘤细胞的增殖力学规律。大量研究表明，DNA倍体及SPF、PI的异常与肿瘤的临床病理特点密切相关，能反映肿瘤的恶性程度及生物学行为。DNA异倍体提示，肿瘤恶性程度高，肿瘤细胞增殖旺盛，肿瘤的复发率高，转移率高，病死率高，预后不良。笔者研究发现，大肠腺癌组织的DNA异倍率与组织类型无明显关系，但与Dukes'分期关系密切，病变越晚，异倍体检出率越高。RNA含量与病变分期和组织学类型均有显著相关性，病变越晚，分化越差，RNA含量越高。本研究中，有淋巴结转移或其它脏器转移的大肠腺癌DNA异倍体检出和RNA含量均比无转移者高，尤其是原发病变较早就有淋巴结转移病人的DNA异倍体检出率更高，RNA含量显著升高。另外，淋巴结和其它脏器转移的越多，DNA异倍体检出率和RNA含量也越高。因此检测DNA和RNA有利于判断肿瘤转移的程度。文献报道 [2] ，大肠癌二倍体癌的5年生存率明显高于异倍体癌。笔者研究结果表明，术后生存5年的标本DNA异倍体检出和RNA含量与1年内死亡病人相比差异均有非常显著性(P<0.01)。22例根治术后复发病人DNA异倍体检出率为95.45%，RNA含量为27.90±7.13，明显高于未复发病人。因此，DNA和RNA含量测定可作为临床判断肿瘤恶性程度、估价临床预后的客观指标，为术中、术后近期有针对性的治疗提供可靠依据。

　　参考文献

　　1 胡成进，杨道理，孙晓明，等.原发性肝癌细胞RNA、DNA含量测定及临床意义.临床军医杂志，2001，29(2):29.

　　2 Douglas E，Merkel MD，WilliamL，et al.Ploidy proliferative and progno- sis DNA flow cytometry of solid trmors.Cancer，1990，65:1194.