子宫颈癌前病变中bcl-2蛋白表达与HPV感染的关系

　　作者：申向东 　陈爱平 刘建平

　　摘要 目的:观察HPV16感染后宫颈癌前病变中bcl-2蛋白表达的特点，探讨HPV在宫颈癌发生发展中的作用。方法:应用引物介导的原位标记(PRINS)技术及SP法对40例慢性宫颈炎，46例慢性宫颈炎伴鳞状上皮化生，44例宫颈上皮内瘤变(CIN)进行HPV16的检测及bcl-2表达。结果:慢性宫颈炎伴鳞状上皮化生组及CIN组的HPV16感染率及bcl-2蛋白阳性率明显高于慢性宫颈炎组(P<0.05);73例HPV16阳性者bcl-2蛋白表达40例，阳性率54.8%，57例HPV16阴性者bcl-2蛋白表达13例，阳性率22.8%，两者比较差异显著(P<0.05)。结论:在慢性宫颈炎、鳞状上皮化生、CIN的进展过程中bcl-2蛋白表达水平逐渐增高。HPV感染在宫颈癌发生发展过程中起重要作用。

　　关键词 人乳头状瘤病毒;bcl-2蛋白;癌前病变;引物介导的原位标记

　　近年来病毒病因学研究认为HPV的感染与宫颈癌发病关系密切，因此HPV检测阳性者，尤其持续HPV感染者，应列为前瞻性研究观察对象 [1] 。我们通过HPV16感染与bcl-2蛋白表达关系的研究，探讨HPV在宫颈癌发生发展过程中的作用。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　选取我院1995年～2001年妇科就诊患者130例，年龄30岁～70岁，平均50岁，其中慢性宫颈炎40例，慢性宫颈炎伴鳞状上皮化生46例，宫颈上皮内瘤变44例，标本均经10%福尔马林液固定，切片厚度4μm。

　　1.2 PRINS检测

　　HPV16型PRINS检测试剂盒有北京大学医学部基础医学院病理学系提供，引物选自HPV16的特异基因序列，操作方法主要步骤如下:切片入0.1%HCl内10min，PBS液洗;蛋白酶K消化，37℃15min，PBS液洗;加入引物反应液，每片50μL，95℃，3min，62℃，1min，PBS液洗;切片入50℃0.1×SSC液内洗5min，PBS液洗;切片加入由TaqE，Dig-dNTPs构成的杂交液，50μL/片，72℃5min，Dig-buffur I液洗;经血清封闭37℃20min，加入Anti-Dig-AP液，30μL/片，37℃1h，Dig-buffur I液洗2×2min;NBT/BCIP系统显色，核固红衬染。结果判断:以细胞核内出现紫蓝色颗粒为阳性标记信号。实验用已知宫颈癌HPV16DNA阳性切片作阳性对照。阴性对照:正常肝组织;切片中以三蒸水取代引物;切片直接以NBT/BCIP显色。

　　1.3 免疫组化染色(SP法)

　　bcl-2采用SP染色，DAB及SP试剂盒由福州买新生物技术有限公司提供，用TBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性反应物质作阳性对照。结果判断:阳性物质定位于细胞膜和(或)细胞质中，核不着色，呈棕黄色。高倍镜下对细胞内反应物阳性强度评分:无着色为0，浅着色为1，深着色为2;阳性范围:无着色为0，着色<1/3为2，弥漫着色为3，两项结果相加≥3为(+)。

　　2 结果

　　2.1 慢性宫颈炎伴鳞状上皮化生组及CIN组的HPV16感染率均明显高于慢性宫颈炎组(P<0.05)见表1。

　　表1 不同宫颈粘膜病变中HPV16的检出率(略)

　　2.2. bcl-2蛋白

　　慢性宫颈炎伴鳞状上皮化生组及CIN组织中bcl-2蛋白阳性表达率均显著高于慢性宫颈炎组(P<0.05)，见表2。

　　表2 不同宫颈粘膜病变中bcl-2蛋白表达(略)

　　2.3 HPV感染与bcl-2蛋白的表达

　　73例HPV阳性者bcl-2蛋白表达40例，阳性率54.89%，57例HPV阴性者bcl-2蛋白表达13例，阳性率22.8%，两者比较，差异显著(P<0.05)。

　　3 讨论

　　bcl-2基因是位于18q21染色体上，在调控细胞程序死亡中具有非常重要的作用，其产物并不加速细胞分裂及增殖，而是促进细胞生存，又称“长寿基因” [2] ，实验结果显示在慢性宫颈炎，鳞状上皮化生，CIN的进展过程中，bcl-2蛋白表达呈上升趋势，且bcl-2蛋白在鳞状上皮化生及CIN阳性率明显高于慢性宫颈炎，说明宫颈黏膜鳞状化生及CIN时，细胞凋亡减少，促使肿瘤生长。

　　本实验结果显示，慢性宫颈炎伴鳞状上皮化生组及CIN组的HPV16感染率均明显高于慢性宫颈炎组(P<0.05);HPV阳性患者与HPV阴性患者bcl-2蛋白阳性表达率比较差异显著(P<0.05)，表明HPV感染是宫颈癌发生的早期事件，与文献报道相似 [3] ，HPV感染与其它有害因素共同作用，在宫颈糜烂面反复感染，诱发粘膜损伤，并促使细胞内bcl-2基因蛋白过度表达，因此细胞凋亡过程受阻。

　　我们通过对HPV16与bcl-2蛋白表达关系的研究，为临床根除HPV感染及预防宫颈癌的发生提供了一定的理论依据。因此，对有HPV感染的癌前病变患者，应积极根治，从而降低宫颈癌发生。

　　参考文献

　　1.赵方辉，戎寿德，乔友林.宫颈癌及其癌前病变筛查方法现状.中国医学科学院学报，2001，23(6):638

　　2.Pillai MR.Jayaprakash PG，Nair MK.Bcl-2immunoreactivity but not p53accumulation associated with tumour response to radiotherapy in cervical carcinoma[J].Cancer Res Clin Oncol，1999，125(1):55～60

　　3.Sheman ME，Schiffman M，Cox JT.Effects of age and human papil-loma viral load on colposoopy triage:data from the randomized atypical squamous cells of undetermined significance/low-grade squamous in-traepithelial lesion triage study.J Natl Cancer Inst，2002，94(2):102