血清指数在P800生化分析仪中的应用

在临床生化检测中，最常以血清为检测标本，但乳糜、溶血、黄疸对分析结果的准确度会产生不同程度的影响[12]。在国内临床生化检测中并没有一个准确的血清外观状况衡量标准或体系[3]，检验工作者一直靠目测判断这些指标，主观性强，造成偏差大，判定程度无法一致，并且不便全面监测血清标本。笔者通过开发和使用罗氏P800生化分化仪的血清指数功能，实现了对乳糜、溶血、黄疸程度的自动测定，并有精确的数值定量评价，同时对血清指数的线性范围、精密度及准确度进行综合研究，得出血清指数在各方面都能满足实验需求，可应用于临床。

1　材料与方法

1.1　仪器与试剂　罗氏P800 全自动生化分析仪;SysmexXE2100血球计数仪。罗氏0.9%生理盐水，总胆红素(TBIL)试剂由上海科华公司提供，批号20110503;三酰甘油(TG)试剂由浙江伊利康公司提供，批号110503;血红蛋白(Hb)由Sysmex公司提供的XE2100配套试剂。

1.2　方法　将8μL 标本加入到含有200μL 的生理盐水的反应杯中，混匀后用罗氏P800 分析系统在波长340、470、600、670nm 处检测吸光度，然后通过计算求得黄疸指数、溶血指数和乳糜指数。

1.3.1　线性实验　血清指数是对血清标本的乳糜、溶血、黄疸的程度进行测定，得出乳糜指数(L)、溶血指数(H)、黄疸指数(I)。罗氏P800 生化分析仪采用波长(主波长/次波长，nm/nm)660/700、570/600、480/505 检测L、H、I 的吸光度EL、EH、EI，并根据以下计算式来校正L、H、I的相互干扰：L=(ΔEL)/C;H=(ΔEHB×ΔEL)/A;I=(ΔEI-E×ΔEH-F× ΔEL)/D，其中ΔEL、ΔEH、ΔEI分别为660/700、570/600、480/505吸光度(ABS×10000)，B、E、F 为吸光光谱中求出的补偿系数，A、D、C 为H、I、L 指数的输出系数(校正系数)，A=25、B=122000、C=10、D=1600、E=19000、F=180000。(1)L 指数线性范围实验：选取脂肪乳注射液，用生理盐水配制成2000、1600、1200、800、400、200、100、20mg/dL8种浓度进行检测。(2)H 指数线性范围实验：取抗凝血，离心去除血浆，用生理盐水洗涤红细胞3次，以红细胞比容为准，加入等量体积的蒸馏水和半量体积的四氯化碳，猛烈振摇5～6 min，高速离心，将上层血红蛋白溶液分离出来[4]，用XE2100 测其浓度，并用生理盐水配制成浓度为1000、800、600、400、200、100、50、10mg/dL。(3)I指数线性范围实验：取TBil标准液，用生理盐水配制成浓度为60、48、36、24、12、6、3、1mg/dL 进行检测。

1.3.2　精密度实验　挑选L 指数异常标本5例，H 指数异常标本5例，I指数异常标本5 例，(L<20，H<5，I<5 判为异常)，每5例异常指数为1组，分成3组。将每组5例标本混合成为1份，放置30min。(1)批内精密度实验：分别将混合后的血清上机检测，每组在1 个批次内尽可能短的时间内连做20次。(2)批间精密度实验：3 组混合血清，每组分成5 份，不同批次间共测4次，每组各累积20次结果。(3)准确度实验：连续2周挑选L 异常的标本13份，挑选H 异常的标本13份，挑选I异常的标本13份，检测结果为正常的标本154例，用罗氏生化P800 测定标本中的TBil和TG，同时用XE2100 测定Hb。1.4　统计学处理　采用的统计软件为简明统计。

2　结果

2.1　线性实验结果国际检验医学杂志2013年1月第34卷第2期　IntJLabMed，January2013，Vol.34，No.2  

2.1.1　以L 指数值为纵坐标，生理盐水配制脂肪乳浓度为横坐标，经统计学处理，L 指数与生理盐水配制脂肪乳浓度之间有直线关系，回归方程y=1.040x-3.591(r>0.999)，在2000mg/dL 内呈线性分布，检测下限可到20mg/dL。

2.1.2　以H 指数值为纵坐标，生理盐水配制血红蛋白浓度为横坐标，经统计学处理，H 指数与生理盐水配制血红蛋白浓度之间有直线关系，回归方程y=1.040x-0.8139(r>0.999)，在1000mg/dL 内呈线性分布，检测下限可到10mg/dL。

2.1.3　以I指数值为纵坐标，生理盐水配制胆红素浓度为横坐标，经统计学处理，I指数与生理盐水配制胆红素浓度之间有直线关系，回归方程y=1.067x-0.2119(r>0.999)，在60mg/dL 内呈线性分布，检测下限可到1mg/dL。2.2　精密度实验　实验结果符合高效检验对精密度的要求，批内变异系数在CLIA 指标2.5% 以内，批间变异系数应在CLIA 指标3.3%以内[5]。见表1。

2.3　准确度实验　测得的TG、TBil、Hb浓度，与相应L、H、I指数水平相比差异无统计学意义(p>0.05)，同时具有高度相关性(r>0.97)。说明L、H、I指数检测功能准确度较高，见表2～3表1　　血清指数批内和批间实验数据血清指数批内均值(mg/dL)批内标准差(mg/dL)批内变异系数批间均值(mg/dL)批间标准差(mg/dL)批间变异系数

L 61.95 0.83 1.34 62.4 1.31 2.1

H 58 0.86 1.48 58.4 1.35 2.31

I 47.45 0.51 1.07 48 0.92 1.92

表2　　标本L、H、I测定结果(ng/dL)标本L均值L标准差H 均值H 标准差I均值I标准差

154例正常标本9.7857 3.2114 2.2727 0.5748 2.2727 0.5748

13例异常标本108.0000 69.3361 265.2308 129.7858 12.4615 9.9467

表3　　标本TG、Hb、TBil测定结果(mg/dL)标本TG 均值TG 标准差Hb均值Hb标准差TBil均值TBil标准差

154例正常标本1.0065 0.3452 2.4058 0.6399 24.0844 6.4024

13例异常标本10.8823 7.0921 267.7692 131.2461 176.0000 135.0277

3　讨　　论

通过对血清指数的线性范围、精密度、准确度的研究，证实血清指数的各项指标均满足实验要求[6]。开展血清指数测定，填补目前没有血清外观监测指标的空白，特别是对一些肉眼无法识别的轻度混浊、溶血、黄疸标本，血清指数测定结果更客观、准确，可减少主观性偏差。同时每份标本的L、H、I指数均与检验结果一起打印在结果报告中，利于临床医师全面了解血清信息，从而协助临床诊断[7]。罗氏P800 生化分析系统血清指数的检测是完全自动的，可全面自动监测血清信息，方便医生及时全面了解标本信息状况[8]，有利于及时发现问题，解决问题，减少医疗差错，减轻患者的经济负担。综上所述，利用全自动生化分析仪开展血清指数测定，一方面可以提醒临床医生注意血清指数可能对检验结果的准确度造成影响[9]，另一方面也减少了检验科与临床科室的质量纠纷。建议实验室开展血清指数测定，从而促进检验科全面质量管理[10]，加强检验与临床的沟通，减少医患纠纷的发生。

参考文献

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(收稿日期：20120918)