鼻息肉组织中TNF-α的表达及其临床意义
发表时间：2009-08-05 浏览次数：639次
作者：蒋双庆 作者单位：545006 广西，柳州医学高等专科学校第二附属医院耳鼻咽喉科
【摘要】 目的 探讨肿瘤坏死因子（TNF-α）在鼻息肉组织中的表达及意义。方法 采用S-P免疫组化法对31例鼻息肉患者和25例正常鼻甲黏膜组进行TNF-α检测。结果 TNF-α在鼻息肉组织中的表达明显高于对照组（P<0.01）。结论 TNF-α存在于鼻息肉组织的微环境中，对鼻息肉的发生、发展变化起重要作用。
【关键词】 鼻息肉；免疫组化；肿瘤坏死因子-α
鼻息肉是鼻科的常见疾病，发病率为1%～5%，其发病是多种因素共同作用的结果。肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactor-α，TNF-α）是一种分子量为17.35 kd的非糖基化蛋白，既有抗肿瘤活性，又能介导炎性反应，活化炎性细胞，增加血管通透性。在炎症反应和组织损伤中发挥重要的生理和病理作用［1］。本研究应用免疫组化技术对鼻息肉组织中TNF-α进行检测，探讨其在鼻息肉的发生、发展过程中的作用。
1 资料与方法
1.1 一般资料 2006年1月至2008年10月在我院行鼻息肉手术的31例患者（鼻息肉组）,其中男17例，女14例；年龄12.9～66.2岁,平均43.6岁。所有患者均无变应性疾病史及近期内未服用类固醇激素、抗组胺药及抗生素药物。术后病理均证实为鼻息肉。25例对照组标本来自因鼻中隔偏曲并下鼻甲肥大而行部分下鼻甲切除患者的下鼻甲黏膜（无全身疾病史、无变态反应史、无慢性鼻窦炎病史），年龄18.2～65.9岁，平均39.4岁。
1.2 检测方法 标本用4%多聚甲醛固定约24 h，行常规石蜡包埋。采用S-P免疫组织化学染色方法检测。常规石蜡切片逐级脱蜡水化后，3%过氧化氢孵育10 min，微波抗原热修复10 min，PBS冲洗，10%正常羊血清室温下封闭10 min，弃去血清，加第一抗体，37 ℃孵育1 h，PBS清洗后再加生物素标记的二抗，室温下10 min，PBS洗后DAB显色，苏木素轻度复染，中性树胶封片。
试剂:一抗采用鼠抗TNF-α单克隆抗体（TNF-α单克隆抗体及SP试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司），每次染色均设阳性喉癌组织切片，及用PBS代替一抗的阴性对照。
1.3 TNF-α阳性标准 TNF-α以细胞质出现棕黄染色颗粒为阳性细胞。计数10个阳性区域的高倍视野（×400倍），取平均值，根据阳性细胞的比例分为:阴性（-）:10个高倍视野未见或偶见1个阳性细胞;弱阳性（+）:每计数格内阳性细胞计数少于5个;中度阳性（++）:每计数格内阳性细胞数6～10个；强阳性（+++）:每计数格内阳性细胞数大于11个。
1.4 统计学方法 采用SPSS 10.0统计软件进行相关统计分析，采用χ2检验和相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
TNF-α在鼻息肉中主要存在于固有浸润细胞，血管内皮细胞，腺体细胞，上皮层可检测到部分阳性细胞，细胞外基质无免疫阳性表达。TNF-α在鼻息肉浸润细胞的阳性表达高于正常下鼻甲黏膜组织，呈高表达（P<0.01）。正常下鼻甲黏膜组织极少见细胞阳性表达。
3 讨论
鼻息肉的发生发展是个复杂的炎性病理过程，主要病理学特征是以嗜酸粒细胞浸润为主的炎性细胞渗出，组织水肿、上皮细胞增生，血管扩张，腺体增生，同时伴有多种炎性细胞浸润［2］。过度激活的炎性细胞可参与激活、释放、诱导和调节多种细胞因子，生长因子刺激上皮增生和化生，血管生成，成纤维细胞增生，基质生成，并且在嗜酸粒细胞浸润局部的聚集以及嗜酸粒细胞的活化过程中可能起到极其重要的作用，从而参与鼻息肉发生发展的过程。鼻息肉的病理学特征是明显的间质水肿和嗜酸粒细胞的浸润。
TNF-α是初级炎性因子，可活化各种炎性细胞，增加血管通透性。TNF-α具有多种促炎生物活性，包括通过上调内皮细胞表达细胞黏附分子的水平（VCAM-1、ICAN-1），促使炎性细胞和血管内皮黏附而跨膜移行［3］。其次也可通过上调GM-CSF和G-CSF水平而延长嗜酸粒细胞的存活时间并使之活化，还可通过刺激嗜酸粒细胞分泌多种炎性介质，导致鼻黏膜局部组织的损伤，直接损伤鼻息肉上皮。
Lee等［4］用RT-PCR、Southern blot分析法及原位杂交检测鼻息肉中特异性的TNF-α mRNA和用ELISA及免疫组化方法检测TNF-α基因产物，证明鼻息肉中含有促炎细胞因子TNF-α，表达TNF-α基因则大多是嗜酸性细胞，而正常鼻黏膜相对较少。提示嗜酸性细胞产生和释放TNF-α是嗜酸性细胞介导的鼻息肉病、哮喘和组织慢性炎症过程中上皮及血管内皮损伤的一种新颖，而且可能是重要的机制。
本研究结果表明，TNF-α在鼻息肉中主要表达于固有层炎性细胞质内和血管内皮细胞、腺体细胞和部分上皮细胞，而且与对照组存在显著性差异，表明TNF-α可通过对血管系统的广泛作用，导致鼻息肉炎性浸润和间质水肿，腺体增生，同时刺激部分结构细胞释放细胞因子，从而使嗜酸粒细胞、中性粒细胞、肥大细胞聚集，这些细胞分泌多种炎性介质，如嗜酸粒细胞阳离子蛋白、前列腺素、白三烯等，导致鼻上皮细胞钠离子吸收增加，氯离子分泌，使水分吸收增加，促进组织水肿，导致鼻息肉的发生［5］。而TNF-α在腺体中的高表达可能是该腺体作为细胞因子作用的靶点，细胞因子经其他细胞分泌后与腺体细胞表面受体结合，经胞外一系列反应从而使腺细胞增殖，且腺细胞本身也可能是产生TNF-α的细胞来源。当组织受到炎症刺激后，活化的腺体细胞开始分泌细胞因子，参与炎症过程。
【参考文献】 1 Michael F.TNF and TNF-α biology in health and disease.Cell Mol Biol，2001，47（4）:619-635.
2 Liu Z,Kim J,Sypek JP,et al.Gene expression profiles in human nasal polyp tissues studied by means of DNA microarray.J Allergy Clin Immunol,2004,114:783-790.
3 马晓峰，康健.鼻息肉中的细胞因子研究进展.中国耳鼻咽喉颅底外科杂志，2004，10:190-192.
4 Lee CH,Rhee CS,Min YG.Cytokine gene expression in nasal polyps.Ann Otol Rhinol Laryngol,1998,107:665-670.
5 Lane AP,Truong-Tran QA,Schleimer RP.Altered expression of genes associated with innate immunity and inflammation in recalcitrant rhinosinusitis with polyps.Am J Rhinol,2006,20:138-144.
