MTT比色法检测贲门中分化腺癌化疗药物敏感性评价
发表时间：2010-06-23 浏览次数：666次
作者：张强,张宾,李新霞,高松 作者单位：泰山医学院附属医院胸外科,山东 泰安 271000
【摘要】 目的 检测贲门中分化腺癌对化疗药物的敏感性。方法 用MTT比色法对45例贲门中分化腺癌的原代细胞进行8种常用化疗药物的敏感性测定。结果 贲门中分化腺癌对5-Fu、DDP和VP-16敏感性较高。结论 个体体外药物敏感性实验有助于贲门中分化腺癌患者选择个体治疗方案。
【关键词】 贲门; 中分化腺癌; 化疗药物; 药敏试验; MTT比色法
Evaluation of chemosensitivity testing with middifferentied cardia adenocarcinoma using an MTT assay
ZHANG Qiang，ZHANG Bin，LI Xin-xia，GAO Song
Dept. of chest Surgey, Affiliated Hospital of Taianshan Medical Colloge, Taian 27100,China
Abstract：Objective: To detect the sensitive of chemotherapeutic drugs in middifferentied cardia adenocarcinoma. Mehtods: We test 45 fresh adenocarcinoma culture cells to 8 chemotherapeutic drugs were tested by MTT assay. Results: 5-Fu,DDP and VP-16 are the highly chemosensitivith drugs to middifferentied cardia adenocarcinoma. Conclusion: The individual chemosensitivith testing is helpful to select individualize chemotherapy for middifferentied cardia adenocarcinoma.
Key words：cardia of stamch; moderately differentiated adenocarcarcinoma ;chemotherapeutic drug; drugs sesitivit ; MTT colorimetry
化疗作为全身性治疗手段在恶性肿瘤的治疗中具有不可替代的作用，但由于个体肿瘤细胞生物学特性存在差异，因此即使相同组织学类型及分化程度的恶性肿瘤临床的治疗效果也不一致，因此探讨不同个体肿瘤的生物学特性及对不同化疗药物的敏感性越来越受到重视[1]。本文采用MTT比色法[2]检测了45例贲门中分化腺癌对临床常用化疗药物的敏感性，旨在了解贲门中分化腺癌敏感性化疗药谱，为临床选择安全、有效的化疗方案提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 临床资料
45例肿瘤病例皆来自于泰山医学院附属医院手术切除的新鲜标本，所有病例都经过病理确诊为贲门中分化腺癌并且未进行任何的化疗和放疗。其中男性33例、女性12例，年龄32～81岁，平均56岁。
1.2 化疗药物
8种化疗药物皆为临床常用药：5-氟脲嘧啶(5-Fu)4 mg/ml、顺铂(DDP)1.5 mg/ml、丝裂酶素(MMC)400 ug/ml、阿霉素(ADM)400 ug/ml、卡铂(CAP)12 mg/ml、长春新碱(VCR)400 ug/ml、阿糖胞苷(Ara-C)10 mg/ml、鬼臼乙叉甙(VP-16)4 mg/ml。用生理盐水配制，置-20 ℃保存，应用时提前放置室温。
1. 3 试剂
完全培养液含15%～18%胎牛血清的RP-MI1640、青霉素500 U/ml、链霉素200 U/ml、MTT5 mg/mL、盐酸异丙醇。
1.4 肿瘤细胞悬液制备
手术切除的新鲜肿瘤标本，无菌条件下去除坏死及血块组织，并剔除脂肪及结缔组织，用含200U/ml青霉素和链霉素的生理盐水冲洗后精修;取大小约为1.5 mm3组织块，机械粉碎，在200目不锈钢网上用注射器芯磨碎、过滤，生理盐水冲洗2遍;将肿瘤细胞悬液1000 P/min离心10分钟。加以RPMI1640培养液制成5×105/ml肿瘤单细胞悬液备用。
1.5 方法
将上述肿瘤单细胞悬液接种于96孔板180 μl/孔，加入各化疗药物5 μl/孔，阳性对照组加入180 μl肿瘤细胞悬液/孔，阴性对照组加入180 μl培养液/孔。每组各设8个复试孔。培养板振荡后置于37 ℃、5% CO2的饱和湿度培养箱培养48 h，取出各孔加入四甲基偶氮唑蓝10 μl，继续培养4h，加盐酸异丙醇100 μl/孔,静止10分钟，置酶标仪测定各孔在570 nm波长的OD值。
1.6 药物对肿瘤的抑制率
药敏抑制率=(阳性对照最高值-实验组最低值)/(阳性对照最高值-阴性对照最低值)。结果判断:抑制率≥70%为高度敏感,50%～70%为中度敏感,≤50%为不敏感。
1.7 统计分析
总敏感率比较采用x2检验。
2 结 果
45例贲门中分化腺癌药物敏感性实验结果见表1,按贲门中分化腺癌细胞对药物高度敏感率的高低排序为5-Fu、CAP、DDP、VP16、Ara-C、VCR、MMC、ADM;按总敏感率的高低排序为5-Fu、DDP 、VP16、CAP、Ara-C、VCR、VP16、ADM 、MMC ;其中 MMC及ADM组敏感率明显低于其它各组(P<0.01)。表1 贲门中分化腺癌体外药物敏感性实验结果(略)注：与前六种药物比较,x2=82.59，*P=0.0000
3 讨 论
对于手术切除的贲门中分化腺癌患者，进行术后化疗是必要的，但是目前临床存在患者化疗效果不理想的问题，原因可能是由于化疗药物种类较多，选择目的性较差，同时存在经验性用药较重的问题，因此通过对化疗药物进行实验敏感率测定，为临床制定个体化的化疗方案提供实验依据。MTT药敏实验方法具有快速、简便及安全等特性，与临床有较好的相关性，是近年来应用较广泛的药敏实验[3]。
本文选取了45例贲门中分化腺癌标本，用MTT法检测了8种化疗药物的敏感性，以观察在贲门中分化腺癌中化疗药物敏感性的高低。实验结果表明贲门中分化腺癌对化疗药物的敏感性普遍较高，其中又以5-Fu、DDP和VP16的敏感性最为显著，其高度敏感率均在45%以上，总敏感率大于88%;而Ara-C和VCR虽然总敏感率较高，但是其高度敏感率明显低于前4种药物，因此总体比较Ara-C和VCR的药效低于5-Fu、DDP和VP16;MMC和ADM总体敏感率及高度敏感率均较低，对于治疗贲门中分化腺癌无明显意义。5-Fu作为贲门中分化腺癌首选药物已经成为大家的共识[4]，同时联合用药已经成为趋势，因此根据实验结果，建议临床对于贲门中分化腺癌的患者可进行5-Fu、DDP和 VP16的联合用药，或者选择DDP和VP16两者其一与5-Fu配伍使用。
体外药物敏感实验，药物直接作用于肿瘤细胞，无法体现肝、肾对药物的修饰排泄作用，同时由于个体差异以及药物相互作用的存在，实验结果不一定与体内的效果完全相符，因此化疗药物的选择在参照药敏实验结果的同时还要结合临床情况全面考虑。近年来又有很多化疗药物出现，因此需要不断的扩展药敏实验的种类以及进一步完善实验方法，包括建立联合化疗药敏实验等，以期能更好的为临床及患者服务。
【参考文献】
[1]Volm M,Wayss K,Kaufmann M,et al.Pretherspulic detection of tumor chemotherapy[J]. Eur J Cancer Res,1997,15:983-5.
[2]Mosmann T.Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival:application to proliferation and cytotoxicity assays[J].J Immumol Methods,1983,65:55.
[3]Iwahashi M, Nakamori M, Nakamura M,et al.Individualized adjuvant chemotherapy guided by chemosensitivity test sequential to extended surgery for advanced gastric cancer[J].Anticancer Res,2005,25(5):3453-9.
[4]Noguchi K, Iwahashi M, Tani M,et al.Evaluation of chemosensitivity testing wit highly purified tumor cells in 435patients with gastric carcinoma using an MTT assay[J].Anticancer Res,2005,25(2A):931-7.
