胸水DNA异倍体及CEA测定对恶性胸腔积液的诊断价值

　　作者：胡蔚,田秀虹,赵惠杰,康欢　　作者单位：吉林市第二中心医院 呼吸科，吉林 吉林 132001

　　【摘要】 目的 探讨胸水DNA异倍体及癌胚抗原(CEA)在恶性胸腔积液诊断中的价值。方法 对32例恶性胸腔积液患者和36例良性胸腔积液患者应用流式细胞术分析胸水DNA异倍体及放射免疫方法测定CEA,比较两组的测定结果。结果 恶性胸腔积液患者中有21例DNA异倍体阳性，阳性率65.6%;良性胸腔积液组均为阴性。胸水CEA测定恶性组18例阳性，阳性率56.3%;良性组5例阳性，阳性率13.8%。两项指标良恶性组间比较差异都有统计学意义(P<0.01)。恶性胸腔积液组DNA异倍体与CEA同时阳性或其中一项阳性者29例，灵敏度为90.6%，特异度为100%。结论 胸水DNA异倍体与胸水CEA联合检测对恶性胸腔积液诊断价值更大。

　　【关键词】 DNA异倍体 癌胚抗原 胸腔积液

　　胸腔积液可由多种病因引起，常见原因为结核性胸膜炎和恶性肿瘤胸膜转移。目前诊断恶性胸腔积液的金标准是胸水中查到肿瘤细胞，但敏感性较低，即使胸腔内已有明显肿瘤转移的患者，胸水病理检查仍可为阴性。临床上20%左右的胸腔积液通过常规检查不能明确诊断。在原发病灶不清楚的情况下，胸腔积液良恶性的鉴别对病因诊断、下一步治疗及预后判断具有重要的价值。本研究对32例恶性胸腔积液患者和36例良性胸腔积液患者分别作胸水DNA异倍体测定、癌胚抗原(CEA)测定及病理细胞学检查，以探讨其在临床诊断中的应用价值。

　　1 资料和方法

　　1.1 病例选择

　　选择2002年3月至2005年10月我院呼吸科因胸腔积液住院患者共68例，其中恶性胸腔积液32例，男19例，女13例，年龄45岁～88岁，平均年龄67.2岁;其中肺癌胸膜转移26例(肺鳞癌3例、腺癌19例、小细胞癌2例、病理类型不明确2例)，乳腺癌胸膜转移4例，膀胱癌胸膜转移1例，胃癌术后1例。以上病例均经胸膜活检、纤维支气管镜病灶活检、胸水细胞学检查及手术标本组织病理学检查确诊，其中胸水中直接查到癌细胞者14例，均为腺癌。良性胸腔积液组36例，男21例，女15例，年龄28～78岁，平均53.6岁;其中结核性胸膜炎31例，脓胸2例，心力衰竭3例，均经胸膜活检、胸腔积液细胞学检查及试验性抗结核治疗有效，胸水控制后2个月内未复发及临床相关资料综合分析确定诊断。

　　1.2 检测方法

　　DNA异倍体采用美国产贝克曼-库尔特(Beckman coulter)Epics XL型流式细胞仪检测。将抽取的胸水标本静止沉淀，用塑料吸管沿瓶底取沉淀物3管并离心(1000r•min-1，5min)，弃上清液;加4ml PBS缓冲液震荡混匀洗涤，离心(1000r•min-1，5min)，弃上清液;将3管沉淀物用干净塑料吸管收集到一起，加70%冷酒精固定24h。次日，将已固定好的胸水标本取出离心(1000r•min-1，5min)，弃上清液;加4ml PBS缓冲液震荡混匀洗涤，离心(1000r•min-1，5min)，弃上清液，留取沉淀物，加1ml PI染液染色0.5h，上机检测至少1万个细胞。判断标准[1]：(1)出现DNA的非整倍体峰为恶性肿瘤细胞;(2)无明显的非整倍体峰，但有1个突出的四倍体峰和大于15%的S期细胞，并伴有G0/G1期CV值大于9%为恶性肿瘤细胞;(3)无明显的非整倍体峰，但G0/G1期CV值增大，并伴有10%～15%的S期细胞和1个突出的四倍体峰，诊断为可疑癌。

　　胸水CEA检测方法采用放射免疫法，试剂盒由北京科美东雅生物技术有限公司提供，正常值<15ng•ml-1，阳性值>20ng•ml-1。

　　1.3 统计学处理

　　两组阳性率的比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　32例恶性胸腔积液组有21例DNA含量呈非整倍体或多倍体分布，阳性率65.6%;良性胸腔积液组均为阴性,两组阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01)。胸水CEA测定恶性组18例阳性，阳性率56.3%;良性组中5例阳性，31例阴性，阳性率13.8%,两组阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01)。DNA异倍体检测灵敏度为65.6%，特异度为100%，准确度83.8%;CEA测定灵敏度为56.3%,特异度为86.1%,准确度为72.1%。恶性胸水组中，DNA异倍体与CEA同时阳性或其中一项阳性者29 例，灵敏度为90.6%，特异度为100%，准确度为88.2%。

　　3 讨 论

　　确诊恶性胸腔积液的金标准是胸水中找到癌细胞，但其阳性率太低，满足不了临床需要。因此临床上迫切需要寻找理想的肿瘤标志物。CEA是存在于癌和胚胎组织中的一种高分子糖蛋白，它首先作为结肠癌的诊断标志物应用于临床。目前作为腺癌的标志物已广泛应用于临床诊断，且在小细胞肺癌和肺鳞癌患者中，其阳性例数也为数不少。CEA是目前肺癌及癌性胸腔积液诊断特异性较好、应用最广的标志物。CEA检测恶性胸腔积液的灵敏度为40%～70%，特异度达5%以上[2]。本研究中，CEA灵敏度为56.3%，与文献报道相符。

　　细胞核DNA含量是细胞增殖的物质基础，其含量与倍体特征直接反映了细胞增殖的活跃程度，人体正常的体细胞均有较恒定的DNA二倍体含量，细胞癌变过程中伴随细胞DNA含量的改变，DNA非整倍体细胞是恶性肿瘤的特异性标志。利用流式细胞仪(FCM)进行胸腔积液脱落细胞DNA定量分析，异倍体的出现高度提示恶性胸腔积液[3]。也有观点认为在胸水中只要找到异常二倍体细胞，几乎皆为恶性肿瘤，从而使细胞形态学诊断方法变为定量诊断，为早期诊断恶性肿瘤提供了依据[2]。目前绝大部分文献报道FCM在鉴别良恶性胸腔积液时的特异度较高，而灵敏度偏低，有文献报道，采用FCM进行细胞核DNA定量分析，以异倍体诊断恶性胸腔积液的灵敏度为52%～94%[4]。本研究观察32例恶性胸腔积液患者，DNA异倍体检测灵敏度为65.6%，特异度为100%，与文献[5]报道一致。若胸水DNA异倍体与CEA联合检测，则对恶性胸腔积液诊断的灵敏度达90.6%，特异度为100%，准确度88.2%。因此我们认为，DNA异倍体分析是鉴别良恶性胸腔积液的一项很有价值的指标，当临床可疑而常规方法不能定性时，通过测定胸水细胞的DNA异倍体及CEA来综合评估，可提高诊断效率。

　　【参考文献】

　　[1]樊英，李龙芸.流式细胞仪DNA倍体分析用于良恶性胸腔积液的鉴别诊断.癌症进展杂志，2005,3(3):249 251.

　　[2]罗词文，李长生，胡浩.胸腔积液诊疗学.北京:科学出版社，2001:128 135.

　　[3]Unger K M,Raber M,Bedrossian C W,et al.Analysis of pleural effuseion using automated flow cytometry[J].Cancer,1983,52(5):873 877.

　　[4]Janet S J,Eppich E,Greenebaum E,et al.Flow cytometry and feulgen cytopotometry in evaluateon of effuseions[J].Cancer,1987,59(7):1307 1313.

　　[5]李桂宾，孙玉红，高颖.良恶性胸水的实验室检查新进展.临床肺科杂志，2005,10(3):361 363.