RANTES-403G/A、MCP-1-2518A/G基因多态性与呼
发表时间：2012-10-25 浏览次数：699次
【摘要】目的：探讨调节激活正常T细胞表达、分泌的细胞因子(RANTES)-403G/A、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)-2518A/G基因多态性与呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎易感性的相关性。方法：应用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测150例RSV毛细支气管炎患儿和120例正常儿童上述位点单核苷酸多态性(SNPs)。结果：病例组RANTES-403G/A基因型和等位基因型频率分别为GG 20.7%、GA 63.3%、AA 16.0%、G 52.3%、A 47.7%，对照组为GG 37.5%、GA 46.7%、AA 15.8%、G 60.8%、A 39.2%，两组基因型频率差异有显著性(P<0.05);病例组A等位基因频率高于对照组(P<0.05)，与G等位基因携带者相比，A等位基因携带者患病风险增加(OR=1.415，P<0.05)。两组MCP-1-2518基因型和等位基因频率差异无显著性(均P>0.05)。结论：RANTES-403 A等位基因与RSV毛细支气管炎易感性相关，其可能是影响发病的一个重要候选基因;未发现MCP-1-2518A/G基因多态性与RSV毛细支气管炎易感性存在关联。
【关键词】 呼吸道合胞病毒;毛细支气管炎;基因多态性;RANTES;MCP-1
Abstract: Objective: To explore the correlation of regulated on activation，normal T cell expressed and secreted (RANTES) and monocyte chemotactic protein 1(MCP-1) gene polymorphisms with the susceptibility of respiratory syncytial virus (RSV) bronchiolitis. Methods:?RANTES-403G/A and MCP-1-2518A/G were genotyped with polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism in 150 children with RSV bronchiolitis and 120 healthy subjects. Results:The frequency of each genotype for RANTES-403G/A was 20.7%?(GG)，63.3%?(GA)，16.0%?(AA) in case group and 37.5%?(GG)，46.7%?(GA)，15.8%?(AA) in control one，respectively. There was significant difference between two groups?(P<0.05). The frequency of each allele was 52.3%(G)，47.7%?(A) in case group，and 60.8%(G)，39.2%?(A) in control group. The frequency of A allele was significantly increased in case group?(P<0.05);Children carrying with A allele increased risk for RSV bronchiolitis compared with those with G allele (OR=1.415， P<0.05). There were no significant differences for genotype and allele frequency of MCP-1-2518A/G between two groups?(P>0.05). Conclusion:?RANTES-403A allele is associated with the susceptibility and may be one of candidate genes for RSV bronchiolitis. No correlation is found between MCP-1-2518A/G gene polymorphisms and the susceptibility of RSV bronchiolitis.
Key words: respiratory syncytial virus;bronchiolitis;gene polymorphisms;regulated on activation，normal T cell expressed and secreted;monocyte chemotactic protein-1
呼吸道合胞病毒(RSV)是婴幼儿下呼吸道感染最常见的病原，研究显示，RSV感染的气道上皮细胞能产生调节激活正常T细胞表达、分泌的细胞因子(RANTES)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)等趋化因子，从而引发过度的气道炎症反应[1-2]。RSV感染患儿鼻腔盥洗液及鼻咽分泌物RANTES水平明显增高，且与疾病严重程度相关[3-4]，有低氧表现的RSV毛细支气管炎患儿鼻炎分泌物中MCP-1水平明显升高[5]，提示趋化因子可能在RSV感染发病中发挥重要作用。几乎所有儿童2岁时均感染RSV，但仅1%～2%需住院治疗，造成病情差异的原因尚不清楚，许多严重RSV感染患儿并不存在早产、先天性心脏病、支气管肺发育不良等高危因素，因此，宿主的遗传因素与RSV感染发病的关系正成为研究的焦点。既往研究已证实调控RANTES和MCP-1的基因位点存在多态性[6-7]。本研究通过病例-对照分析，探讨RANTES-403G/A、MCP-1-2518A/G的单核苷酸多态性(SNPs)与RSV毛细支气管炎易感性的相关性，筛选与疾病易感性相关的SNP位点。
1 对象和方法
1.1 对象 病例组为2006年11月-2007年3月入住温州医学院附属育英儿童医院呼吸科，诊断为RSV毛细支气管炎患儿150例，其中男111例，女39例，年龄1～24个月，有早产、双胎、先天性心脏病、支气管肺发育不良、免疫缺陷等基础疾病者除外。对照组选择同期健康体检的儿童120例，男92例，女28例，年龄2～24个月。两组均无特应性疾病史及家族特应性疾病史，均为汉族，无血缘关系。
1.2 方法
1.2.1 基因组DNA提取：用Chelex-100快速提取法提取基因组DNA。
1.2.2 聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测：各位点信息、引物、产物长度、PCR反应条件及限制性内切酶见表1。PCR反应体系为20μL：Primer F(10μmol/L)1μL，Primer R(10μmol/L)1μL，dNTPMix(2 mmol/L)2μL，MgCl2(25 mmol/L)1.6μL，10×Buffer 2μL，DNA模板2μL，Taq DNA聚合酶(1?U/μL) 1.5μL，去离子水8.9μL。取PCR产物5μL，限制性内切酶3 U，10×Buffer 1μL，余用去离子水补齐，总体积为10μL，37 ℃水浴箱中酶切过夜。30 g/L琼脂糖凝胶鉴定基因型(见图1、图2)。
1.3 统计学处理方法 基因型与等位基因频率Hardy-Weinburg平衡吻合程度用x2检验;基因型及等位基因频率的比较用x2检验;用Logistic回归模型判断等位基因型对发病危险度的影响。
2 结果
2.1 RANTES-403G/A基因型及等位基因分布 病例组和对照组均可见GG、GA、AA 3种基因型，以GA杂合子基因型为主;经Hardy-Weinberg平衡检验，对照组的遗传平衡，表明该群体来自同一孟德尔群体(x2=0.052，P>0.05);而病例组的遗传不平衡(x2=10.894，P<0.05)。两组基因型频率差异有显著性(x2=10.024，P<0.05);病例组A等位基因的频率明显高于对照组(x2=3.912， P<0.05)(见表2);与G等位基因携带者相比，A等位基因携带者患RSV毛细支气管炎的风险明显增加 (OR=1.415，95%CI:1.003～1.996，P<0.05)。
2.2 MCP-1-2518A/G基因型及等位基因分布 病例组和对照组均可见GG、GA、AA 3种基因型，以GA杂合子基因型为主;经Hardy-Weinberg平衡检验，对照组的遗传平衡(x2=0.468，P>0.05);而病例组的遗传不平衡(x2=8.153，P<0.05)。两组基因型和等位基因型频率差异均无显著性 (见表3)。
3 讨论
RANTES基因位于人染色体17q11.2-q12，该区域与哮喘等特应性疾病基因连锁，目前，RANTES基因启动子区研究最多的3个多态性位点分别为-403G/A、-109T/C、-28C/G。其中-403位点G/A的变异，可能对其基因转录造成影响，从而影响疾病的发生发展。Fryer等[8]发现白人哮喘和特应性个体-403A等位基因频率高于正常个体，推断-403A与哮喘易感性和特应性有关。文惯宇等[9]也报道-403A可能是特应性体质的易感因素，但未发现RANTES-403G/A位点基因多态性与RSV毛细支气管炎的相关性。Amanatidou等[10]的研究则发现，RANTES基因-28C/G、-403G/A和Aln1.1T/C位点与RSV毛细支气管炎的易感性均无关，但基因型同时为-28C/C、-403G/A和Aln1.1T/T的个体易患该病。本研究结果显示温州地区RSV毛细支气管炎患儿和正常儿童均存在GG、GA和AA 3种基因型，两组基因型频率差异有显著性，RSV毛细支气管炎组RANTES-403A等位基因频率高于对照组，与携带G等位基因个体相比，携带A等位基因的个体患毛细支气管炎风险增加了1.415倍，提示RANTES-403A等位基因与RSV毛细支气管炎易感性相关，可能是影响RSV毛细支气管炎发病的一个重要候选基因。
MCP-1编码基因位于人染色体17q11.2，由3个外显子和2个内含子组成，该段基因亦与哮喘等特应性疾病基因连锁。目前，MCP-1启动子区研究最多的两个多态性位点为-2518G/A和-2076A/T。Rovin等[7]报道MCP-1-2518位点基因多态性影响MCP-1的转录及表达水平，MCP-1-2518G等位基因能使MCP-1转录增多，从而使其蛋白表达水平上调。Szalai等[11]发现MCP-1-2518G等位基因可增加婴幼儿哮喘的易感性，并与病情相关。目前国内外尚无MCP-1-2518G/A基因多态性与RSV感染发病的报道，本研究未发现MCP-1-2518G/A基因多态性与RSV毛细支气管炎易感性之间存在关联。
综上所述，本研究结果提示RANTES-403A可能是影响RSV毛细支气管炎发病的一个重要候选基因，尽管未发现MCP-1-2518G/A基因多态性与RSV毛细支气管炎易感性之间存在关联，但RANTES和MCP-1位于同一染色体的同一区段，两位点所形成的单体型与RSV毛细支气管炎易感性是否相关，有待进一步探讨。另外，RANTES基因多态性只能部分解释RSV毛细支气管炎的易感性，本课题组其他研究发现TNF-α-308A等位基因、IL-8-251A与781C等位基因形成的AC单体型均与RSV毛细支气管炎的易感性相关，这些易感基因相互之间是否存在联合或协同作用，目前尚不明了，有待今后进一步研究。
【参考文献】
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