血管内皮生长因子受体-1对肝癌侵袭转移的影响
发表时间：2010-01-07 浏览次数：703次
血管内皮生长因子受体-1对肝癌侵袭转移的影响作者：艾军华 郑树国 曾永毅 张雷达 董家鸿 作者单位：400038 重庆，第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所、中国人民解放军西南肝胆外科医院 【摘要】 目的 通过检测血管内皮生长因子受体-1（vascular endothelial growth factor receptor-1，VEGFR-1）在肝癌组织中的表达，探讨VEGFR-1在肝癌侵袭、转移中的作用。方法 共取82例肝癌组织和癌旁肝组织的石蜡标本，采用免疫组织化学方法检测VEGFR-1、上皮标志物E-钙黏蛋白和间叶标志物波形蛋白的表达情况，并分析其关系。对肝癌患者临床病理学指标和HBV感染中VEGFR-1的表达进行分析。结果 癌旁肝组织中无VEGFR-1表达，肝癌组织中VEGFR-1的表达率为89%（73/82）。VEGFR-1的表达在肿瘤分期、门静脉癌栓、肿瘤包膜、肿瘤直径、分化程度差异有统计学意义（χ2=22.192，15.934，16.751，20.154，6.487，P＜0.05）；对术后1、2年的复发率和术后2年生存率有影响（χ2=0.983，0.958，0.847，P＜0.05）；对术后1年的生存率无影响（χ2=0.359，P＞0.05）。VEGFR-1与E-钙黏蛋白的表达呈负相关（r=0.765，P<0.01），而与波形蛋白的表达呈正相关（r=1.469，P＞0.05）。结论 VEGFR-1可能在肝癌的侵袭、转移中发挥作用，其促肝癌侵袭转移可能与肝癌细胞发生上皮-间叶样表型转化有关。 【关键词】 肝肿瘤； 血管内皮细胞生长因子受体-1； 侵袭转移 Effects of vascular endothelial growth factor receptor-1 on the invasion and metastasis of hepatocellular carcinoma AI Jun-hua, ZHENG Shu-guo, ZENG Yong-yi, ZHANG Lei-da, DONG Jia-hong.Institute of Hepatobiliary Surgery & Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China 【Abstract】 Objective To investigate the effects of vascular endothelial growth factor receptor-1 （VEGFR-1） in the invasion and metastasis of hepatocellular carcinoma （HCC） by detecting the expression of VEGFR-1 in HCC tissues. Methods Paraffin-embedded tissue which containing HCC tissues and adjacent tissues were prepared from patients （n=82） with HCC, then were analyzed by immunohistochemical technique for the expression of VEGFR-1, epithelial marker E-cadherin and mesenchymal marker Vimentin. The relationship between the expression of VEGFR-1 and pathological parameters, and the correlation between VEGFR-1 and E-cadherin, VEGFR-1 and Vimentin were analyzed. Results The expression rates of VEGFR-1 in HCC tissues and adjacent tissues were 89% （73/82） and 0, respectively. The difference of VEGFR-1 expression in portal vein tumor thrombus, tumor capsule, stage, size and differentiation grade of tumor had statistical significance （χ2=22.192，15.934，16.751，20.154，6.487，P＜0.05）. The expression of VEGFR-1 had effect on the 1-, 2-year recurrence rate and 2-year survival rate （χ2=0.983, 0.958, 0.847, P＜0.05）, but not on 1-year survival rate （χ2=0.359, P＞0.05）. The expression of VEGFR-1 was negatively correlated with that of E-cadherin （r=0.765, P<0.01） but positively with that of Vimentin （r=1.469, P＞0.05）. Conclusions VEGFR-1 may play an important role in invasion and metastasis of HCC. Epithelial-mesenchymal transition that induced by VEGFR-1 may contribute to the invasion and metastasis of HCC. 【Key words】 Liver neoplasm; Vascular endothelial growth factor receptor-1; Invasion and metastasis 血管内皮生长因子受体-1（vascular endothelialgrowthfactorreceptor-1，VEGFR-1）是血管内皮生长因子的特异性受体，与相应的血管内皮生长因子结合，刺激血管内皮细胞增殖、迁移，促进新生血管的生成。新近研究发现，血管内皮细胞表达的VEGFR-1在机体多种恶性肿瘤中也有表达，其活化通过诱导上皮-间叶表型转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT），与多种恶性肿瘤的发病及侵袭转移有密切的关系［1］。本研究旨在探讨VEGFR-1在原发性肝癌中的表达及其在肝癌侵袭、转移中的作用。1 材料与方法 1.1 材料 收集我所2005年1月至12月手术切除的原发性肝癌标本82例，均经病理检查证实。其中男63例，女19例；平均年龄42岁（36～67岁）。患者手术前未经任何抗癌治疗。每例标本均包括肝癌组织及癌旁肝组织。以肿块长径作为肿瘤直径，肿瘤数目多于1个者，取直径最大的肿瘤及癌旁肝组织，取材标本经分装后液氮保存并石蜡包埋，记录患者病历号并编号，由病理科医生进行诊断和病理分级。病理分级参照WHO制定的分级标准［2］。肝癌分期参照中国抗癌协会肝癌专业委员会制定的标准［3］。SP羊超敏试剂盒和兔浓缩型超敏试剂盒购自福州迈新生物技术公司；VEGFR-1兔抗人多抗为美国Labvision公司产品；羊抗人上皮标志物E-钙黏蛋白和间叶标志物波形蛋白购自美国Santa Cruz公司。 1.2 方法 根据文献［4］方法进行制备。每个标本做4张连续切片，其中1张常规苏木精-伊红染色，另3张分别以VEGFR-1、E-钙黏蛋白和波形蛋白为一抗做免疫组织化学染色，操作严格按试剂盒说明书进行。分别以抗VEGFR-1、E-钙黏蛋白和波形蛋白的阳性片子为阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。 1.3 结果判断 高倍显微镜下观察细胞着色情况，对每张切片的阳性细胞率及阳性细胞着色强度分别进行分级记分，然后根据两项之和确定其阳性表达强度。每张切片任意选5个视野，观察其细胞着色情况，无表达为阴性（0分）、阳性颗粒呈浅黄色为可疑阳性（1分）、浅棕色为弱阳性（2分）、棕黄色为阳性（3分）、棕褐色为强阳性（4分）。计算阳性细胞百分数（5个视野的平均数），无表达为阴性（0分）、1%～15%为可疑阳性（1分）、16%～50%为弱阳性（2分）、51%～85%为阳性（3分）、86%～100%为强阳性（4分）。强度指数=阳性细胞表达强度×阳性细胞百分数×50%。 1.4 统计学方法 采用两样本率比较的χ2检验，相关性分析行Spearman检验。P<0.05为差异有统计学意义。2 结果 2.1 肝癌组织及癌旁肝组织VEGFR-1、E-钙黏蛋白和波形蛋白表达 73例不同程度地表达VEGFR-1（图1），主要表达于细胞膜，呈棕褐色颗粒状，阳性表达率为89%（73/82）。癌旁肝组织中均没有检测到VEGFR-1（表1）。在肝癌组织和癌旁肝组织中VEGFR-1的表达差异有统计学意义（χ2=34.941，P＜0.01）。此外，E-钙黏蛋白在肝癌组织中随着VEGFR-1表达的增强而有所减少，呈负相关（r=0.765，P<0.01）。表达的E-钙黏蛋白位于细胞膜或细胞质近细胞膜处，呈棕褐色颗粒状（图2）。波形蛋白在肝癌组织随着VEGFR-1表达的增强而增强，呈正相关（r=1.469，P>0.05）。表达的波形蛋白主要位于细胞质内，呈棕色颗粒（图3）。表1 肝癌组织及癌旁肝组织中VEGFR-1、E-钙黏蛋白和波形蛋白的表达（略） 2.2 临床病理指标中VEGFR-1表达的情况 VEGFR-1的表达在肿瘤直径、包膜、分期、分化程度和门静脉癌栓方面差异有统计学意义（P＜0.01），而在HBV感染、肿瘤数目差异无统计学意义（P＞0.05），结果见表2。表2 各临床病理指标中VEGFR-1表达的情况（略） 2.3 VEGFR-1对预后的影响 在VEGFR-1表达阳性的患者中，1年生存率78%（57/73），1年复发率59%（43/73），2年生存率64%（47/73），2年复发率68%（50/73）；表达阴性患者分别为78%（7/9）、55%（5/9）、67%（6/9）、55%（5/9），两者的1年复发率、2年生存率、2年复发率差异有统计学意义（χ2=0.983，0.847，0.958，P<0.05）。3 讨论 肝癌组织中表达血管内皮生长因子并具有促肿瘤血管生成等作用已达成共识，但对其受体表达和功能的认识尚不一致。这可能与各学者使用的检测方法和评判标准不同有关。 在原发性肝癌组织中VEGFR-1的阳性表达率达89%，而癌旁肝组织中没有VEGFR-1表达。肿瘤包膜完整与否、肿瘤分期和分化程度高低、门静脉有无癌栓是评价肿瘤恶性程度高低、肿瘤是否容易发生侵袭转移的重要指标。我们发现，VEGFR-1表达在肿瘤直径、包膜、分期、分化程度和门静脉癌栓方面差异有统计学意义，而在HBV感染、肿瘤数目差异无统计学意义。这说明VEGFR-1表达对肝癌的侵袭、转移有一定的作用。 在结肠癌、胰腺癌等恶性实体肿瘤中表达的VEGFR-1活化后通过诱导EMT促进恶性肿瘤侵袭和转移［1］。EMT是胚胎发育和各种组织的形态发生事件中建立细胞层所必需的过程，也是癌转移和病理性纤维化的主要机制［5］。在该过程中细胞失去上皮细胞特性并获得间叶细胞的特性如细胞迁移和侵袭能力增加，上皮标志物如E-钙黏蛋白表达下降，间叶标志物如波形蛋白等表达上调。在本研究中，E-钙黏蛋白在肝癌组织中的表达随着VEGFR-1表达的增强而减弱，呈负相关；而波形蛋白则随着VEGFR-1的表达增强而增强，呈正相关。VEGFR-1促肝癌侵袭、转移可能是通过诱导EMT而实现的。 越来越多的证据表明EMT在原发肿瘤转移到血循环的过程中发挥特殊的作用，并且为开发更为有效的抗癌治疗提供理论依据［6］。如果VEGFR-1活化能通过诱导EMT促进肝癌侵袭、转移，那VEGFR-1及其下游信号转导通路中的某些关键转录因子将成为治疗原发性肝癌侵袭、转移的有效靶点，也为防治肝癌复发、转移提供新的思路。【参考文献】 ［1］Bates RC, Goldsmith JD, Bachelder RE, et al. Flt-1-dependent survival characterizes the epithelial-mesenchymal transition of colonic organoids. Curr Biol,2003,13（19）:1721-1727. ［2］Paul K, Webster KC. Ganglioglioma and gangliocytoma. Pathology & Genetics Tumor（WHO）. Lyon: IARC Press,2000:96. ［3］中国抗癌协会肝癌专业委员会.原发性肝癌的临床诊断与分期标准.中华肝脏病杂志，2001，9（6）：324. ［4］文灿，黄世武，余汇洋.人胃癌组织中fibulin-5的表达及其临床意义.消化外科，2006，5（6）：463-465. ［5］Iwano M, Plieth D, Danoff TM, et al. Evidence that fibroblasts derive from epithelium during tissue fibrosis. J Clin Invest,2002,110（3）:341-350. ［6］Huber MA, Kraut N, Beug H. Molecular requirements for epithelial-mesenchymal transition during tumor progression. Curr Opin Cell Biol,2005,17（5）:548-558.
