胃癌患者血浆可溶性血管内皮细胞生长因子的检测及其意义

　　作者： 袁捷 ，刘顺英(1.南京医科大学附属南京第一医院消化科，江苏南京 210006;2.东南大学附属中大医院消化科，江苏南京 210009)

　　[摘要]目的: 应用定量ELISA法检测胃癌患者血浆可溶性血管内皮细胞生长因子(VEGF)的水平，并探讨其临床意义。 方法: 采用定量酶联免疫吸附试验双抗体夹心法检测32例胃癌患者和20例正常对照人群的血浆可溶性VEGF水平。 结果: 血浆可溶性VEGF水平胃癌患者显著高于正常对照人群，分化程度较差、有区域淋巴结转移和远处转移的胃癌患者显著高于分化程度较好、没有区域淋巴结转移和远处转移的患者。 结论: 血浆可溶性VEGF浓度对于预测胃癌的侵袭和转移可能具有重要临床意义。

　　[关键词] 胃癌;血浆;血管内皮细胞生长因子

　　血管形成是肿瘤生长和转移的重要条件。Hanah-an提出的“血管形成的开关假设”认为，肿瘤血管形成过程受到开关的调节，当血管形成因子的浓度上升或抑制因子浓度下降，血管形成开关处于开放状态，新生血管大量形成，肿瘤则持续生长。

　　肿瘤组织诱导的血管形成是一复杂的多因素调节过程，自Folkman于1973年提出肿瘤血管生成因子概念以来，已陆续发现多种血管生成因子。血管内皮细 胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)由 Farrare等于1989年首次从小牛垂体滤泡细胞体外培养液中纯化提取，是目前所知道的最强的直接作用于血管内皮细胞的生长因子。

　　本研究应用定量ELISA法检测胃癌患者血浆可溶性VEGF的水平，并探讨其临床意义。

　　1 材料与方法

　　1.1 标本来源

　　以本院经病理确诊的胃癌初治患者(未经化疗)32例为实验组，其中男25例，女7例，平均年龄58.78岁。以南京市中心血站献血员20人为正常对照组，其中男12人，女8人，平均年龄36.23岁。每人采抗凝外周血3ml，离心后提取血浆层-20℃冻存待检测。

　　1.2 实验方法

　　采用酶联免疫吸附试验双抗体夹心法检测胃癌患者血浆可溶性VEGF水平，人VEGF ELISA试剂盒由深圳晶美生物工程有限公司提供。终止后即刻以BIO.RAD550型酶标仪测量OD 450 值，通过标准曲线转换为浓度值。

　　1.3 统计方法

　　数据以SPSS11.5统计软件进行t检验和方差分析，以P<0.05为差异具有显著性。

　　2 结 果

　　32例胃癌患者血浆可溶性VEGF水平为(79.58±15.41)ng?L-1 ，显著高于20例正常对照人群的(26.94±9.07)ng?L -1 (P=0.006)。

　　作者对实验组血浆可溶性VEGF水平与患者的年龄、性别、肿瘤分化程度、浸润深度、有无区域淋巴结转移、远处转移之间的关系进行了t检验或方差分析。结果表明，年龄≤60岁和>60岁的两组患者间血浆可溶性VEGF水平差异无显著性;不同性别的两组患者间血浆可溶性VEGF水平差异无显著性;不同分化程度的3组胃癌患者间血浆可溶性VEGF水平存在显著性差异(P=0.043);胃癌浸润深度达到T3、T4和浸润深度为T1、T2的两组患者间血浆可溶性VEGF水平差异无显著性;有区域淋巴结转移的患者血浆可溶性VEGF水平显著高于没有淋巴结转移的患者(P=0.044);有远处转移的患者血浆可溶性VEGF水平显著高于没有远处转移的患者(P=6.87×10 -6 )。见表1。

　　3 讨 论

　　VEGF是由二硫键连接的高度糖基化碱性蛋白，是血小板源性生长因子家族的一个成员。人的VEGF基因全长14kb，由8个外显子和7个内含子组成。VEGF通过旁分泌作用能够特异地作用于血管内皮细胞，诱导其分裂、增殖，是血管形成的最重要始动因子[1] 。VEGF还是非常强力的高通透性诱导剂，能刺激许多蛋白酶和蛋白酶活化剂的基因上调，具有促进小 表1 胃癌患者血浆可溶性VEGF水平与临床资料的关系

　　Maeda等发现胃癌组织中VEGF的阳性表达率明显高于正常对照，推测VEGF与胃癌的血管生成密切相关，对胃癌的生长和浸润转移有促进作用[2] ;Werther等报道实体肿瘤患者血清中可溶性VEGF水平高于健康志愿者 [3] ，血清VEGF浓度高预示大肠癌患者的总体存活率低[4] ，推测VEGF与肿瘤的血管生成密切相关，对肿瘤的生长和浸润然而，由于血小板和中性粒细胞中均含有VEGF [5] ，在血液凝集、血小板活化的过程中会释放出VEGF[6] ，故血清中VEGF的浓度可能并不代表真正的可溶性VEGF水平，血清VEGF的意义受到质疑。Ad-ams等报道，与正常对照相比，乳腺癌患者血浆VEGF而不是血清VEGF水平明显增高[7] 。

　　本研究表明，胃癌患者血浆VEGF的水平显著高于正常人。胃癌患者血浆VEGF水平与其年龄、性别及胃癌的浸润深度无关，与胃癌分化程度、有无区域淋巴结转移和有无远处转移有关。胃癌分化程度较差、有区域淋巴结转移和有远处转移的患者，血浆VEGF水平有显著性增高。

　　本研究测定血浆中可溶性VEGF的浓度，排除了血小板和中性粒细胞中VEGF对实验造成的干扰，结果更能代表真实的VEGF水平。血浆中可溶性VEGF浓度的检测，对于预测胃癌的侵袭和转移可能具有更为重要的临床意义。

　　[参考文献]

　　[1]童允洁，邹萍，张敏，等.VEGF反义寡核苷酸对K562细胞 VEGF表达的影响[J].现代医学，2004，32(4):223.226.

　　[2]MAEDA K，CHUNG Y S，OGAWA Y，et al.Prognostic value of vas-cular endothelial growth factor expression in gastric carcinoma[J]. Cancer，1996，77(5):858.863.

　　[3]WERTHER K，CHRISTENSEN I J，NIELSEN H J，et al.The asso-ciation between preoperative concentration of soluble vascular endo-thelial growth factor，perioperative blood transfusion，and survival in patients with primary colorectal cancer[J].Eur J Surg，2001，167(4):287.292.

　　[4]WERTHER K，CHRISTENSEN I J，BRUNNER N，et al.Soluble vascular endothelial growth factor levels in patients with primary colorectal carcinoma[J].Eur J Surg Oncol，2000，26(7):657.662.

　　[5]NIELSEN H J，WERTHER K，MYNSTER T，et al.Soluble vascular endothelial growth factor in various blood transfusion components [J].Transfusion，1999，39(10):1078.1083.

　　[6]BANKS R E，FORBES M A，KINSEY S E，et al.Release of the an-giogenic cytokine vascular endothelial growth factor(VEGF)from platelets:significance for VEGF measurements and cancer biology [J].Br J Cancer，1998，77(6):956.964.

　　[7]ADAMS J，CARDER P J，DOWNEY S，et al.Vascular endothelial growth factor(VEGF)in breast cancer:comparison of plasma，se-rum，and tissue VEGF and microvessel density and effects of tamox-ifen[J].Cancer Res，2000，60(11):2898.2905.