盐水凝聚胺试验在交叉配血中的临床意义

　　作者：冯学冠,郑三,符晓玲,吴忠旺,谭壮华,黎海江,马琳 作者单位：海南医学院附属医院输血科,海南 海口 570102

　　【摘要】目的：检测盐水凝聚胺试验在交叉配血中的临床意义。 方法:对4 216例住院申请输血患者用盐水凝聚胺法做交叉配血试验,出现凝集者再用微柱凝胶卡抗体筛查试验做不规则抗体筛检。 结果: 用盐水凝聚胺交叉配血试验检测4 216例输血的血浆标本中出现凝集15例, 其中主侧出现凝集的14例、次侧凝集1例。经用微柱凝胶卡抗体筛查试验比较，结果其中主侧出现凝集14例抗筛为阳性，另1例次侧出现凝集为供血者抗筛阳性，二法结果完全一致，抗体检测阳性率为0.33%。 结论:盐水凝聚胺交叉配血法是既能检测IgM抗体，又能检出IgG抗体的方法，且操作简便、快速、敏感性强、结果准确可靠，对临床输血的安全具有重要的意义。

　　【关键词】 凝聚胺试验; 盐水法;交叉配血; 不规则抗体

　　Clinic application of saline polybrene solution test in cross matching

　　FENG Xueguan, ZHENG San, FU Xiaoling, WU Zhongwang, TAN Zhuanghua, LI Haijiang, MA Lin

　　(Department of Blood Transfussion, Affiliated Hospital to Hainan Medical University Haikou 570102, China)

　　[ABSTRACT] Objective: To investigate the clinic application of saline polybrene solution test in cross matching.Methods: Employed saline polybrene solution test to 4 216 cases applying for blood transfussion, and carried out irregular antibody screening with microcolumn gel card to cases with agglutination.Results: Saline polybrene solution test showed 15 out of 4 216 cases had agglutination, including 14 cases on main side and 1 case on subside, while antibody screening showed the same result, with the positive rate as 0.33%.Conclusion: Cross matching with saline polybrene solution can detect IgM and IgG. It is rapid, sensitive, accurate and easy to operate. And it is valuable in clinic application.

　　[KEY WORDS] Polybrene solustion test; Saline method; Cross matching; Inregular antibody

　　交叉配血是输血前必不可少的,是保证输血安全的重要措施[1]。传统的盐水介质法只能检测出完全抗体, 凝聚胺法可检测出不完全抗体,交叉配血需要2个试验来完成。我们应用盐水凝聚胺法一个试验即可检出完全抗体和不完全抗体,经与微柱凝胶卡抗体筛查试验比较，结果表明该方法操作简便、快速、灵敏、结果准确。现报道如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 检测对象

　　选择2007年11月～2009年12月在我院住院申请输血患者4 216例，其中男性2 342例,女性1 874例,年龄5 d～87岁。

　　1.2 试剂

　　凝聚胺试剂由珠海贝索生物技术有限公司提供;抗体筛查试验使用珠海保亚美有限公司提供的DiaMed凝胶微柱卡，标准筛查谱细胞( I、Ⅱ、Ⅲ) 由上海血液生物医药有限责任公司提供。

　　1.3 方法

　　1.3.1 盐水凝聚胺交叉配血

　　用生理盐水分别将患者和供血者的血液稀释成5%的红细胞悬液,取试管2支，标明主侧、次侧，主侧管加患者血清(血浆)2滴，加供血者5%红细胞悬液1滴，次侧管加病人5%红细胞悬液1滴，加供血者血清(血浆)2滴,混匀，3 400 r/min离心15 s。轻轻摇动试管，观察结果(如出现凝集,表明血型不相符;如不出现凝集继续以下试验) 。 每管各加低离子溶液0.7 mL，混合均匀后，再各加凝聚胺溶液2滴，并混合均匀。离心机3 400 r/min离心15 s，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1 mL液体。轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。最后加入悬浮液2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果,如果在30 s内凝集散开，代表是由凝聚胺引起的非特异性聚集，配血结果相容;如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。

　　1.3.2 DiaMed微柱凝胶卡抗体筛查试验

　　在卡的3个孔中分别加入抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ红细胞50 μL;再在3个孔中加入25 μL待检样本血浆,37 ℃孵育15 min,离心10 min,判断结果,1+～4+为抗体筛查阳性。

　　2 结果

　　在4 216例患者盐水凝聚胺交叉配血中，出现凝集15例，其中主侧出现凝集的14例、次侧凝集1例。经用微柱凝胶卡抗体筛查试验对15例盐水凝聚胺交叉配血中出现凝集的患者血浆进行检测，结果其中主侧出现凝集14例抗筛为阳性，另1例次侧出现凝集为供血者抗筛阳性(经血液中心溯源该供血者为女性，有妊娠史)，二法结果完全一致。4 216例(男性2 342例，女性1 874例)受血者共检出不规则抗体阳性14例，阳性率为0.33%，其中男性5例，女性9例;男性均有输血史，女性9例中6例有妊娠史;其中3例既有输血史又有妊娠史;男性阳性率为0.21%，女性阳性率为0.48%，女性检出率明显高于男性。

　　3 讨论

　　交叉配血是在血型鉴定的基础上，通过交叉配血试验进一步证实受血者和供血者之间不存在血型不合的抗原一抗体反应，以保证受血者的输血安全。人类的血型抗原主要有ABO系统抗原和RhD抗原;抗体有抗A、抗B、抗AB和Rh(抗D、C、c、E、e)、 Kel(抗K、k)、 Kidd(抗Jka、Jkb)、 Lewis(抗Lea、Leb)、抗M、抗N、抗S、抗s和抗p1 等。这些抗体中除了抗A,抗B和抗AB为完全抗体外，其余均为不完全抗体。完全抗体均为IgM抗体，分子量较大，可在盐水介质中与相对应的抗原发生凝集反应;不完全抗体指ABO系统以外的其他血型抗体，多为IgG抗体，分子量较小，在盐水介质中只能致敏相应抗原的红细胞，而不能使之凝集，必须通过特定的方法(如抗人球蛋白)使致敏红细胞发生凝集。

　　上世纪90年代前，输血前的交叉配血工作只使用盐水法，这种方法通常不能发现不规则抗体。在输血过程中或输血后，可能会发生一些不良的输血反应，其中最有临床诊断意义的是免疫性溶血性输血反应，造成此反应的发病机制就是由于输入不相容的全血、红细胞或血浆时，红细胞与相应的抗体结合，直接激活补体，使大量红细胞在血管内凝集破坏，形成溶血性输血反应，严重者可危及病人的生命。凝聚胺法是通过中和红细胞表面的负电荷,缩短红细胞之间的距离,引起红细胞的非特异性凝集,促进红细胞抗原与相应的抗体结合，当加入悬浮液以后,如果存在与红细胞抗原相应的抗体,凝集不消失。如果没有与红细胞抗原相应的抗体,凝聚胺诱导的凝集现象消失,此方法的结果观察从凝集到无凝集的过程。

　　我们用盐水凝聚胺试验在交叉配血的4 216例患者血浆中检出不规则抗体14例，阳性率为0.33%,高于日本0.16%的报道[2]，与国内的报道的0.37%～ 0.85%相似[35]。阳性标本全部经微柱凝胶试验所证实。不规则抗体阳性率在性别方面女性明显高于男性, 这可能是与女性曾经的妊娠史有关。我们还检测到1例供血者血液中存在不规则抗体的情况，虽然卫生部明文规定对有输血史或妊娠史的输血者必须做不规则抗体筛查，但对供血者没有明确要求，一般情况下血液中心也没有对供血者检测不规则抗体。国内有人对供血者做不规则抗体筛查时发现其阳性率高达0.85%[5]。所以在交叉配血时能有一种既能检测出完全抗体又能检测出不完全抗体的方法对临床输血的安全具有重要的意义。

　　盐水凝聚胺交叉配血法是既能检测IgM抗体，又能检出IgG抗体的方法，且操作简便、快速、敏感性强、结果准确可靠，我们认为是目前应用于临床交叉配血的一种理想方法。盐水介质交叉配血法虽操作简便，但只能检测出血清中存在的完全抗体及ABO血型不合引起的凝集，无法检测血清中存在的不完全抗体。输血科采用盐水凝聚胺法进行交叉配血试验结果可靠和安全，优于盐水交叉配血法，能尽早尽快发现不完全抗体情况的出现，及时有效地进行交叉配血试验，避免输血不良反应的发生。

　　【参考文献】

　　1 张玲.血液科输血管理与实践[J].实用临床医药杂志,2008,14,9697.

　　2 孔令宜,马三科,马长仁,等.成份输血与临床应用[M].沈阳:辽宁科技出版社,1994.369429.

　　3 Widmann FK著.肖星甫,季阳,尚书颂译.输血技术手册[M].北京:人民卫生出版社,1985.242264.

　　4 曹奎杰,胡丽华,刘峰. 不规则抗体检查在临床输血中的应用[J]. 临床血液学杂志,2002,15 (4):163.

　　5 吕蓉,刘忠,方勤.合肥地区4000 名献血者红细胞血型抗体筛选结果[J]. 中国输血杂志,1998,11(3):154.